兔抗綿羊紅細胞（溶血素）的使用介紹

兔抗綿羊紅細胞（溶血素）的使用介紹

利用綿羊細胞與(yu) 相應抗體(ti) （溶血素）結合成的複合物，可激活血清中的補體(ti) ，導致紅細胞溶解，當紅細胞和溶血素量一定時，在規定反應的時間內(nei) ，溶血程度與(yu) 補體(ti) 量及活性呈正相關(guan) 。在接近50%溶血（CH50）時，二者之間近似直線關(guan) 係，故以50%溶血作為(wei) 最敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的最小補體(ti) 量為(wei) 一個(ge) CH50U，可計算出待測血清中總的補體(ti) 溶血活性，以 CH50U /ml表示。

產(chan) 品全稱:凍幹兔抗綿羊紅細胞（凍幹溶血素）

規格：0.5ml*10支

效價(jia) ：1:4000

批號：20230511

保存：-20℃，避光保存，避免反複凍融

有效期：12個(ge) 月

使用方法：臨(lin) 用前，每瓶加去離子水或者雙蒸水0.5ml重建後立即使用（10小時內(nei) ），不得反複使用。

相關(guan) 實驗測定步驟：（僅(jin) 供參考）

本試驗主要反映補體(ti) 經典活化途徑的溶血功能，其結果與(yu) 補體(ti) C1~C9各組成分的量及活性均有關(guan) 。

1．試劑及配製

(1)緩衝(chong) 生理鹽水：

①貯存液：

Na2HPO4·12H20   2.85g

KH2PO4               0.27g （加蒸餾水至100毫升，4℃保存）

NaCl                    17.00g

②應用液（緩衝(chong) 液）:5毫升貯存液加95毫升蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1毫升。當日配製。12小時內(nei) 使用。

(2)2%綿羊紅細胞：無菌采取綿羊血液，於(yu) 等量Alsever液中可保存3周。用前以緩衝(chong) 液

洗3次，並配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。

(3)溶血素：將本品（效價(jia) 1:4000)，用緩衝(chong) 液做1:2000倍稀釋（即1ml溶血素加1999毫升緩衝(chong) 液）。

(4)待測血清：新鮮血液室溫放置30分鍾，再4℃放置60分鍾，收縮。4℃離心

(3000r/min )10分鍾，取上清，-20℃保存。

2．試管法操作步驟（改良 Mayer 法）

(1)致敏羊紅細胞：2%綿羊紅細胞加等量稀釋後的溶血素（1:2000)，混勻，置37℃水浴30分鍾。

(2)稀釋血清：待測血清0.2ml，加緩衝(chong) 液3.8ml，稀釋度為(wei) 1:20。

(3)配製溶血標準管：2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水，混勻，即為(wei) 全溶血管。取全溶血管液2ml加緩衝(chong) 液2m1，即為(wei) 50%溶血管。

(4)按表所示，依次加各成分於(yu) 試管中，混勻，置37℃水浴30分鍾。第10管為(wei) 非溶血對照。

             補體(ti) CH50 測定試管法

結果測定：取出試管，2000r/min 離心10分鍾，對照管應不溶血。肉眼比色，選與(yu)

50%溶血標準管相近二管，再用分光光度計測（波長542nm、0.5cm比色杯）OD 值，確定與(yu) 標準管接近者為(wei) 終點管，然後按下公式計算CH50值：血清補體(ti) CH50 ( U /ml)=(1／血清用量）x 稀釋度。

如第5管為(wei) 終點管，測待測血清中 CH50為(wei) 66.7U/ml 。血清補體(ti) CH50正常值為(wei) 50-100U/ ml 。

兔抗綿羊紅細胞（溶血素）的使用介紹