祝賀複旦大學老師訂購我司：細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒

祝賀複旦大學老師訂購我司：細胞核蛋白與(yu) 細胞漿蛋白抽提試劑盒，上海信帆供應細胞核蛋白與(yu) 細胞漿蛋白抽提試劑盒，產(chan) 品質量穩定，*，歡迎聯係！

      在研究細胞時經常要研究細胞的不同組份，而研究得多的兩(liang) 個(ge) 細胞組份就是細胞核和細胞漿。分離細胞核蛋白和細胞漿蛋白，不僅(jin) 可以用於(yu) 研究蛋白在細胞內(nei) 的定位，而且很多時候分離出來的核蛋白可以用於(yu) 轉錄調控方麵的研究，例如EMSA(也稱gel shift)，footprinting等。
      細胞核蛋白與(yu) 細胞漿蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡單、方便的從(cong) 培養(yang) 細胞或新鮮組織中抽提細胞核蛋白與(yu) 細胞漿蛋白的方法。約90分鍾就可以完成培養(yang) 細胞的細胞核蛋白與(yu) 細胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用於(yu) Western，EMSA，footprinting，報告基因檢測以及酶活力測定等後續操作。
      本試劑盒是通過細胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細胞充分膨脹，然後破壞細胞膜，釋放出細胞漿蛋白，然後通過離心得到細胞核沉澱。後通過高鹽的細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。
     對於(yu) 細胞樣品，如果每個(ge) 樣品的數量不超過二百萬(wan) 個(ge) 細胞，本試劑盒可以抽提50個(ge) 樣品；對於(yu) 組織樣品，如果每個(ge) 樣品的重量不超過30毫克，本試劑盒可以抽提50個(ge) 樣品，如果每個(ge) 樣品約為(wei) 30-60毫克，本試劑盒可以抽提37個(ge) 樣品。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存，一年有效。

使用說明：
1. 準備溶液：室溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解後立即放置在冰上，混勻。取適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A備用，在使用前數分鍾內(nei) 加入PMSF，使PMSF的終濃度為(wei) 1mM。取適當量的細胞核蛋白抽提試劑備用，在使用前數分鍾內(nei) 加入PMSF，使PMSF的終濃度為(wei) 1mM。
2. 對於(yu) 貼壁細胞：用PBS洗一遍，用細胞刮子刮下細胞，或用EDTA溶液處理細胞使細胞不再貼壁很緊，並用移液器吹打下細胞。離心收集細胞，盡大努力吸盡上清，留下細胞沉澱備用。盡量避免用胰酶消化細胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 對於(yu) 懸浮細胞：用PBS洗一遍，離心收集細胞，盡大努力吸盡上清，留下細胞沉澱備用。
4. 每20微升細胞沉澱加入200微升添加了PMSF的細胞漿蛋白抽提試劑A。(對於(yu) 二百萬(wan) HeLa細胞，其細胞沉澱的體(ti) 積大約為(wei) 20微升或40毫克。)
5. 高速劇烈Vortex 5秒，把細胞沉澱*懸浮並分散開。(如果細胞沉澱沒有*懸浮並分散開，可以適當延長vortex時間。)
6. 冰浴10-15分鍾。
7. 加入細胞漿蛋白抽提試劑B 10微升。高速劇烈Vortex 5秒，冰浴1分鍾。
8. 高速劇烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g離心5分鍾。
9. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為(wei) 抽提得到的細胞漿蛋白。可以立即使用，也可以凍存。(千萬(wan) 不要觸及沉澱，可以在沉澱上方保留極小體(ti) 積的上清，以免觸及沉澱。每200萬(wan) 細胞用200微升本產(chan) 品中的細胞漿蛋白抽提試劑A裂解後可獲得的上清，其細胞漿蛋白濃度約為(wei) 2-5mg/ml，不同細胞有所不同。)
10. 對於(yu) 沉澱，*吸盡殘餘(yu) 的上清，加入50微升添加了PMSF的細胞核蛋白抽提試劑。(不吸盡上清會(hui) 帶來細胞漿蛋白的汙染。)
11. 高速劇烈Vortex 15-30秒，把細胞沉澱*懸浮並分散開。然後放回冰浴中，每隔1-2分鍾再高速劇烈Vortex 15-30秒，共30分鍾。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鍾。
13. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為(wei) 抽提得到的細胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃凍存。每200萬(wan) 細胞用50微升本產(chan) 品中的細胞核蛋白抽提試劑裂解後獲得的上清，其細胞核蛋白濃度約為(wei) 1.2-3.0mg/ml，不同細胞有所不同。
14. 對於(yu) 新鮮組織：
a. 把組織盡可能切成非常細小的碎片。按照20:1的比例混合適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A和B(例如200微升細胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B)。並加入PMSF至終濃度為(wei) 1mM配製成組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液(對於(yu) 不超過30mg的組織樣品，僅(jin) 需加入100微升組織勻漿液)，並在玻璃勻漿器內(nei) 充分勻漿。勻漿需在冰浴或4℃進行。
b. 勻漿後把勻漿液轉移到塑料離心管內(nei) ，冰浴放置15分鍾。
c. 4℃ 1,500g離心5分鍾。把上清轉移至一預冷的塑料管中，為(wei) 抽提得到的部分細胞漿蛋白。(吸上清時千萬(wan) 不要觸及沉澱。)
d. 對於(yu) 沉澱，到了這一步已經充分勻漿，但很多細胞還沒有破碎。接下去按照使用說明的步驟4開始操作，即把沉澱當做已經離心收集好的細胞沉澱操作，按照步驟4至步驟13抽提得到細胞漿蛋白和細胞核蛋白(特別說明：對於(yu) 起始量為(wei) 30-60mg的組織樣品，後續直接按照步驟4-13操作即可；對於(yu) 起始量不超過30mg的組織樣品，後續步驟4-13中的溶液的用量須減半使用)。抽提得到的細胞漿蛋白可以和步驟14c中抽提得到的細胞漿蛋白合並。新鮮的肝髒組織用本產(chan) 品裂解後獲得的上清，其細胞漿蛋白濃度約為(wei) 3-10mg/ml，細胞核蛋白濃度約為(wei) 3-10mg/ml，不同狀態的不同組織有所不同。