小鼠核因子-κB亞基p65親和肽（NF-κB p65）試劑盒真的太棒了

小鼠核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65)試劑盒真的太棒了

檢測目的

本試劑盒用於(yu) 測定小鼠血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65) 含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中小鼠核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65) 水平。用純化的小鼠核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65) 抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65) ，再與(yu) HRP標記的核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65) 抗 體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65) 呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標 準曲線計算樣品中小鼠核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65) 濃度。

第五部分 操作步驟

• 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

小鼠核因子-κB亞(ya) 基p65親(qin) 和肽(NF-κB p65)試劑盒真的太棒了

• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然後再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。
• 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此

 重複 5 次，拍幹。

• 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
• 溫育：操作同 3。
• 洗滌：操作同 5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

     10 分鍾.

• 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液後 15 分鍾以內(nei) 進行。

注意事項

1．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控製在 5 分鍾內(nei) ，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大於(yu) 標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計 算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

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