植物阿魏酸elisa試劑盒的操作方法！

 植物阿魏酸elisa試劑盒的操作方法！
 

檢測目的：

本試劑盒用於(yu) 測定植物血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中阿魏酸含量。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中植物阿魏酸水平。用純化 的植物阿魏酸抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中 依次加入阿魏酸，再與(yu)  HRP 標記的阿魏酸抗 體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的阿魏酸呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標 準曲線計算樣品中植物阿魏酸濃度。

操作步驟：

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然後再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為(wei)  5 倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此

    重複 5 次，拍幹。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

        15 分鍾.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液後 15 分鍾以內(nei) 進行。

注意事項：

1．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控製在 5 分鍾內(nei) ，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大於(yu) 標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計 算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

 植物阿魏酸elisa試劑盒的操作方法！