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上海信帆為您提供熒光蛋白上樣緩衝液!

更新時間:2018-01-02      瀏覽次數:1339

上海信帆為(wei) 您提供熒光蛋白上樣緩衝(chong) 液!

產(chan) 品簡介:

熒光蛋白上樣緩衝(chong) 液在電泳前的樣品處理階段對SDS-PAGE的蛋白樣品進行預染,標記上熒光。實驗完成以後,凝膠中或轉膜後的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數字成像係統進行觀察和分析,無需染色脫色。
熒光蛋白上樣緩衝(chong) 液靈敏度高比銀染高。穩定性強,背景低。可對所有蛋白進行染色,不影響蛋白的遷移率與(yu) 電泳圖譜。電泳過程中,遊離的染料分子與(yu) 溴酚藍的遷移速率一致,跑膠結束時 移至凝膠末端,背景幹淨。熒光蛋白上樣緩衝(chong) 液非常適合用於(yu) 追蹤蛋白表達純化以及Western blot的SDS-PAGE。

使用步驟    

1. 請在使用前根據管壁標簽上的體(ti) 積加入resuspension buffer重懸。Resuspension buffer在4℃可能會(hui) 有沉澱產(chan) 生,室溫下放置至沉澱消失。
2. 將用上樣緩衝(chong) 液處理的蛋白樣品與(yu) 待電泳蛋白樣品1:2混合。比如,3ul 上樣緩衝(chong) 液 + 6ul 蛋白樣品。
3. 90-100℃加熱上述處理的樣品混合液5分鍾。細胞或組織樣品,加熱時間延長至10分鍾。確保加熱溫度>90℃使樣品充分受熱。
Ÿ 大部分預製膠(Bis-Tris體(ti) 係除外)可以直接進行下一步。Bis-Tris體(ti) 係的預製膠(如Life Technology),需加入20%已處理樣品體(ti) 積的Enhancing buffer。比如,10ul已處理的樣品需加入2ul Enhancing buffer。
4. 樣品可以上樣進行電泳了(無需再加Loading Buffer處理)。
5. 電泳結束後,將凝膠放至透射儀(yi) 上進行觀察和拍照。透射儀(yi) 可以是紫外燈,藍光LED燈或其它凝膠成像係統。如果光源在可見光波長範疇的無需剝膠,因為(wei) 可見波長範圍內(nei) 的光可以穿透玻璃或塑料材質的膠板。
6. (可選的)如果有需要,經熒光蛋白上樣緩衝(chong) 液處理的凝膠仍可進行考染。按標準的考染步驟進行即可。

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注意事項:

1. 請勿使用該上樣緩衝(chong) 液處理預染的或預處理的蛋白分子量標準。這些產(chan) 品與(yu) 熒光蛋白上樣緩衝(chong) 液不兼容。
2. 靈敏度影響因素:GAO pH(大於(yu) 7)不會(hui) 影響染色,低pH則會(hui) 降低染色的效率,如果樣品的pH低於(yu) 5,建議將pH調整至7以上。
3. 熒光蛋白上樣緩衝(chong) 液不適合在如下SDS-PAGE實驗中使用:切割蛋白條帶用以測序、質譜分析或抗體(ti) 製備。

4. 建議-20保存,如果室溫放置2-3周,則可添加新的DTT,蛋白條帶會(hui) 重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP(2 mM), 效果也很好。

規格

每個(ge) 規格包含3管:Instant-Bands, Resuspension Buffer 和Enhancing buffer。隻有使用Bis-tris 膠時才需要加Enhancing Buffer.

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