信帆生物銷售各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒！

信帆生物銷售各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒！

規格：200 mL/kit

保存：本產(chan) 品對光敏感，應該室溫避光儲(chu) 存，保質期 1 年。無菌開封後，保存於(yu) 室溫。

試劑盒組成：

試劑A 200mL

試劑C 100mL

細胞洗滌液 200mL

紅細胞裂解液 100mL

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血，血液體(ti) 積小於(yu) 5mL時，在離心管中先加入4mL試劑A，後將2mL試劑C小心疊加於(yu) 試劑A之上，形成梯度界麵（血液體(ti) 積大於(yu) 等於(yu) 5mL，試劑A與(yu) 試劑C比例2：1，試劑總量與(yu) 稀釋後的樣本量相等。但二者的總體(ti) 積不能超過離心管的三分之二，否則會(hui) 影響分離效果），將血液平鋪到分離液麵上方，注意保持兩(liang) 液麵界麵清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然後將血液小心的平鋪於(yu) 分離液上，因為(wei) 兩(liang) 者的密度差異，將形成明顯的分層界麵。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離心之前出現紅細胞成團下沉屬正常現象。）

2. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min（血液的體(ti) 積越大所需的離心力越大，離心時間越長，*的分離條件需摸索，離心轉速zui大不超過1200g）。

3. 離心後，離心管中將出現兩(liang) 層環狀乳白色細胞層，上層細胞為(wei) 單個(ge) 核細胞層，下層細胞為(wei) 中性粒細胞層，如圖所示（個(ge) 體(ti) 差異或者是分離條件不同，粒細胞層可分離不明顯）。

4. 用吸管小心吸取試劑C與(yu) 試劑A之間以及試劑A中的中性粒細胞到15mL潔淨的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌細胞。250g，離心10min（如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液）。

5. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。

6. 重複步驟6

7. 棄上清，細胞重懸備用。

信帆生物銷售各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒！

注意事項：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為(wei) 無菌產(chan) 品，為(wei) 延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免
微生物汙染。。

B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nei) 溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是
分離示意圖溫度較低的條件下離心，可能會(hui) 導致白膜層中紅細胞汙染加重。

C. 血液樣本為(wei) 新鮮抗凝血（采血2 h以內(nei) ），為(wei) 保持淋巴細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。

D. 血液樣本不需稀釋，直接進行分離即可。

E. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩衝(chong) 液及培養(yang) 液，其成分會(hui) 導致血細胞凝集，
大大降低細胞得率及純度。

F. 部分塑料製品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(hui) 導致細胞掛壁，影響分離效果。

G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(hui) 影響分離效果，可以調節離心轉數和離心時間，摸
索*的分離條件。

H. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yang) ，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生
物汙染。

I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散係數及細胞帶電不同，用戶在製定分離液時應提
供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

信帆生物銷售各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒！