上海信帆生物：蛋白凝膠染料隨心選，不止是考馬斯藍

與(yu) DNA凝膠電泳一樣，蛋白質凝膠電泳也是實驗室中稀鬆平常的工作。無論是Western blot還是質譜分析，都離不開蛋白電泳。研究人員通過大小（1D）和電荷（2D）來分辨蛋白質。當然，僅(jin) 僅(jin) 分離蛋白是不夠的，它們(men) 必須要經過染色。染料的選擇有很多，具體(ti) 選哪種，這取決(jue) 於(yu) 靈敏度要求、現有的設備和下遊的應用。

常規之選

研究人員主要使用三種染料來處理日常的蛋白凝膠：考馬斯藍、銀染和熒光。據Sigma-Aldrich公司蛋白技術的研發Jeffrey Turner介紹，染料的選擇基本上可以歸結為(wei) “靈敏度 vs. 速度”。

考馬斯藍也許是zui常用的染料。作為(wei) 一種可見的顯色（亮藍色）染料，它不需要任何特殊的設備。不過，Bio-Rad的業(ye) 務開發Ning Liu認為(wei) ，它的靈敏度也zui低，檢測極限大約在10-100 ng蛋白質。

很多公司提供不同配方的考馬斯藍染料，它們(men) 在使用簡便程度、整體(ti) 染色時間和脫色要求上各有不同。例如，有些需要在乙醇/乙酸中固定，而有些隻使用純水。Expedeon的InstantBlue™試劑可在電泳後直接添加到凝膠中，而不需要固定或脫色，染色可在15分鍾內(nei) 完成。Bio-Rad的QC Colloidal Coomassie Stain操作則建議慢慢來，以便達到更好的效果。整個(ge) 過程包括在40%乙醇/10%乙酸中固定15分鍾，之後染色1-20個(ge) 小時，再脫色1-3小時。

有了賽默飛世爾推出的Pierce™ Power Stainer，研究人員可以讓考馬斯藍染色自動化。據它的產(chan) 品Emily Goplen介紹，這台設備可對兩(liang) 塊凝膠進行染色和脫色。“盡管傳(chuan) 統的染色需要幾小時甚至，Power Stainer卻能在10分鍾內(nei) 完成染色和脫色的過程，並且預製膠和自製膠都適用，”她說。

另一種常用方法是銀染，每條帶的靈敏度大約在0.1-0.25 ng。操作過程沒有脫色步驟，但是一個(ge) 很長的過程，大約在2小時左右，而且相當講究。此外，據Turner介紹，操作需要用到一些有害的化學物質，如甲醛和銀，在通風櫥中進行。因此，人們(men) 一般不大願意用這種方法，除非靈敏度很重要。

熒光染料的靈敏度則居中，可檢測幾納克的蛋白質，不過你得有一個(ge) 兼容的凝膠成像係統或透射儀(yi) 。與(yu) 考馬斯藍和銀染一樣，熒光染色通常在電泳後進行，需要固定和脫色，不過也有例外。例如，SYPRO Ruby需要脫色，但Oriole和Flamingo不需要，因為(wei) 遊離的染料不發熒光。“染料本身不會(hui) 被激光激發，隻有當它與(yu) 蛋白結合時才被激發，”Liu解釋道。

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