PRODUCT CLASSIFICATION
產品分類環狀RNA(Circular RNA, CircRNA),是一種廣泛存在於(yu) 生物體(ti) 內(nei) 的特殊RNA分子,與(yu) 線性RNA相比,穩定性高,現已證實CircRNA廣泛存在於(yu) 生物體(ti) 內(nei) ,與(yu) 線性RNA相比,穩定性高,對microRNA具有重要調控作用。CircRNA於(yu) 2012年被科學家發現,2013年Nature雜誌報道兩(liang) 篇關(guan) 於(yu) CircRNA的研究成果,由此關(guan) 於(yu) CircRNA的研究開始引起科學家的重視。利用高通量測序技術可鑒定CircRNA在生物樣本中的種類、表達豐(feng) 度及結構,對CircRNA的研究起到重要的推動作用。
項目流程:
RNA樣品
樣品檢測
去除rRNA
去除線性RNA
CircRNA片段化
雙鏈cDNA合成
片段選擇和PCR擴增
上機測序
數據質控
生物信息分析
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分析內(nei) 容:
分析項目 |
原始數據整理、過濾及質量評估 |
參考基因組注釋信息整理 |
比對到參考基因組及結果評估 |
eggNOG分類分析 |
circRNA篩選 |
circRNA表達量統計 |
circRNA來源基因分析 |
circRNA差異表達分析 |
差異circRNA GO富集分析 |
差異circRNA KEGG富集分析 |
差異circRNA 聚類分析 |
microRNA結合位點分析 |
| CircRNA測序 |
樣本要求 | RNA樣品總量: ≥4 μg; RNA樣品濃度: ≥80 ng/μL |
rRNA去除 | Illumina rRNA去除試劑盒 |
線性RNA去除 | Illumina RNase R |
文庫類型 | 鏈特異性文庫 |
測序平台 | Illumina HiSeq 4000/NextSeq 500平台 |
讀長模式 | 2×150bp |
數據量要求 | 5G/10G |
項目周期 | 50個(ge) 工作日 |
案例分析1:
RNA結合蛋白QKI調節環狀RNA的形成
The RNA Binding Protein Quaking Regulates Formation of circRNAs
澳大利亞(ya) 南澳大學,南澳病理學研究所的研究人員通過高通量測序和蛋白組學等手段,對人HMLE細胞係細胞和發生上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)後的mesHMLE細胞進行了研究,發現EMT過程中大量的circRNA的形成會(hui) 受到RNA結合蛋白QKI的動態調控,並且證實插入QKI蛋白結合位點的正常線性剪接體(ti) 也會(hui) 形成新的circRNA結構。這些發現表明了circRNA在EMT即上皮間質轉化中發揮著特定的生物學作用。
圖1 全轉錄組的總circRNA和來源於(yu) 無差異高豐(feng) 度轉錄本的circRNA的分布比例
圖2 circRNA及其同源線性mRNA的豐(feng) 度差異倍數的相關(guan) 性
圖3 circRNA在HMLE(上皮細胞)和 mesHMLE(間質化細胞)中的相對豐(feng) 度
案例分析2:
天然環狀RNA有效的起到micro RNA海綿的作用
Natural RNA circles function as efficient micro RNA sponges
mi RNA活性已被證明受mi RNA海綿體(ti) 存在的影響, 奧爾胡斯大學分子生物學和遺傳(chuan) 學、神經生物學研究等研究人員在人和小鼠腦中發現高度表達的環狀RNA,稱之為(wei) ci RS-7。在老鼠大腦中,我們(men) 觀察到ci RS-7和mi R7共表達,尤其是在皮層和海馬神經元,說明高度的內(nei) 生互動;進一步研究證明睾丸中特殊的環狀RNA--Sry,作為(wei) 一個(ge) mi R - 138海綿體(ti) ,表明mi RNA海綿體(ti) 普遍受到環狀RNA結構的影響。
圖1 ci RS-7的結構、保持和異源表達
圖2 ci RS-7和mi R-7之間的交互作用
圖3 ci RS-7作為(wei) 一個(ge) 海綿體(ti) 作用於(yu) mi R7
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