上海信帆生物：IPTG全麵介紹：優點·使用·配製·特點

中文名：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)

英文名稱：Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside

用途：異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。IPTG 常用於(yu) 需要誘導 β-半乳糖苷酶活性的克隆實驗。它常與(yu) X-Gal 或 Bluo-Gal 結合使用，用於(yu) 重組細菌菌落的藍白篩選，這些菌落可以誘導 lac 操縱子在大腸杆菌中的表達。IPTG 與(yu) lacI 阻遏蛋白結合並改變其構象而發揮作用，防止 β-半乳糖苷酶編碼基因 lacZ 的抑製。

使用方法：首先把IPTG配製成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液，並進行過濾除菌後保存。然後在100 ml的瓊脂培養(yang) 基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml)，製作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yang) 基。當dna片段插入至pUC係列載體(ti) (或其他帶有lacZ、Amp基因載體(ti) )，然後轉化至lacZ缺失細胞中後，塗布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yang) 基，可根據長出菌體(ti) 的藍白色，而方便地挑選出基因重組體(ti) (白色為(wei) 具有DNA插入片段的基因重組體(ti) )。

配製方法：在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG後，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存於(yu) -20℃。

優(you) 點：

1.能誘導酶的合成，但又不被分解的分子，稱為(wei) 安慰誘導物。由於(yu) 乳糖雖可誘導酶的合成，但又隨之分解，產(chan) 生很多複雜的動力學問題，因此人們(men) 常用安慰誘導物來進行各種實驗。

2.IPTG不被菌體(ti) 代謝，為(wei) 乳糖類似物，一旦進入細胞就會(hui) 產(chan) 生持續長久的誘導效果，所以IPTG的誘導效率高，往往隻需要很少量(1mmol/L)即可達到理想誘導效果。由於(yu) IPTG不被代謝，在胞內(nei) 專(zhuan) 一誘導外源蛋白的表達。不受細胞代謝的影響，誘導效果持續穩定。乳糖有雙效作用，既能做為(wei) 誘導劑異乳糖的前體(ti) 物質，又可以做碳源，在誘導過程中，很不穩定，IPTG因其優(you) 異的穩定性決(jue) 定了它適合做實驗研究用。

3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。

4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與(yu) 酶位點的親(qin) 和力相同，IPTG雖不為(wei) β–半乳糖苷酶所識別，但它是lac基因簇十分有效的誘導物。

注意事項：培養(yang) 噬菌體(ti) 時，Top agar中的添加量為(wei) ：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有

IPTG 的培養(yang) 基4℃避光保存，須在1~2 周內(nei) 使用。

保存：2-8°C冷藏保存，配製好後保存於(yu) -20°C，室溫可放置一個(ge) 月。遠離熱源及氧化劑。

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