上海信帆生物：免疫組化的儀器試劑和標準操作過程

（一）、儀(yi) 器設備

1）18cm不鏽鋼高壓鍋或電爐或醫用微波爐；
2）水浴鍋

（二）、試劑

1）pbs緩衝(chong) 液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。
2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩衝(chong) 液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉 3g，檸檬酸 0.4g。
3）0.5mol/L EDTA緩衝(chong) 液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH調至pH8.0,加水至1000ml。
4）1mol/L的TBS緩衝(chong) 液（pH8.0）：在800ml水中溶
解121gTris堿，用1N的HCl調至pH8.0,加水至1000ml。
5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配製。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配製。
6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配製。
7）封裱劑：
a、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩衝(chong) 液（pH9.0～9.5）等量混合；
b、油和TBS(或PBS)配製。
8）TBS/PBS pH9.0～9.5，適用於(yu) 熒光顯微鏡標本；pH7.0～7.4適合於(yu) 光學顯微鏡標本。

（三）、操作流程

1、脫蠟和水化
脫蠟前，應將組織芯片在室溫中放置60分鍾或60℃恒溫箱中烘烤20分鍾。
1）組織芯片置於(yu) 二甲苯中浸泡10分鍾，更換二甲苯後再浸泡10分鍾；
2）無水乙醇中浸泡5分鍾；
3）95%乙醇中浸泡5分鍾；
4）70%乙醇中浸泡5分鍾；

2、抗原修複
用於(yu) 福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片。
1）抗原熱修複
（1）高壓熱修複 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸櫞酸鈉緩衝(chong) 溶液（pH6.0）。蓋上不鏽鋼高壓鍋的蓋子，但不進行鎖定。將玻片置於(yu) 金屬染色架上，緩慢加壓，使玻片在緩衝(chong) 液中浸泡5分鍾，然後將蓋子鎖定，小閥門將會(hui) 升起來。10分鍾後，去除熱源，置入涼水中，當小閥門沉下去後打開蓋子。本方法適用於(yu) 較難檢測或核抗原的抗原修複。
（2）煮沸熱修複 電爐或者水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩衝(chong) 溶液（pH6.0）至95℃左右，放入組織芯片加熱10~15分鍾。
（3）微波熱修複 在微波爐裏加熱0.01M枸櫞酸鈉緩衝(chong) 溶液（pH6.0）至沸騰後將組織芯片放入，斷電，間隔5~10分鍾，反複1-2次。適用的抗原有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit，C-myc，E-cadherin，Chromogranin A，Cyclin，ER，Heat shock protein，HPV，Ki-67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，P-glycoprotein，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。
2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預熱至37℃，切片也預熱至37℃，消化時間約為(wei) 5~30分鍾；胃蛋白酶消化37℃時間為(wei) 30分鍾。適用於(yu) 被固定遮避的抗原，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN等。

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