細胞成活率形態學觀察法及檢測法

細胞成活率形態學觀察法及檢測法：

細胞成活率，判斷之形態學觀察法：

細胞內(nei) 出現顆粒或空泡。

細胞內(nei) 如果出現顆粒物質，表明細胞處於(yu) 非健康狀態。

同樣，細胞內(nei) 出現空泡也說明細胞處於(yu) 非健康狀態。

 細胞喪(sang) 失雙折射性：

如果發生在單層細胞：一個(ge) 具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環），則提示該細胞已經死亡，即zui終幹枯死亡。

如果發生在：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內(nei) 出現顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。

怎樣去除死細胞？單層培養(yang) 的細胞死亡後，一般會(hui) 漂浮起來，因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養(yang) 則要通過密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細胞。

細胞成活率檢測實驗

即刻檢測實驗——

染料櫃染實驗：原理——萘黑、台盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與(yu) 染料混勻，在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞；生長液；0.25%胰酶；PBSA.非滅菌材料即：血細胞計數板；生存力染料；巴斯德吸管；顯微鏡；手執計數器。操作步驟：

1、用胰蛋白酶消化或離心，重懸製備高深度的細胞懸液

2、取一塊幹淨的血細胞計數板，將蓋玻片固定在適當位置上。

3、將一<滴細胞懸液和一滴（台盼藍）或四滴（萘黑）染料混勻/li>

4、加至血細胞計數板的計數室中。

5、靜置1~2min（但不要放置很久，否則活細胞會(hui) 受到損傷(shang) 而吸收染料）。

6、將計數板置於(yu) 顯微鏡下，用10倍物境找到計數網格。

7、計數總及著色細胞的數目。

8、清洗血細胞計數板，放入盒內(nei) 。

實驗分析-計算未著色細胞的百分數，該數字即為(wei) 本方法所得出的細胞生存力百分數。

據統計，原代培養(yang) 細胞成活率一般為(wei) 50%~90%。細胞係一般為(wei) 90%~100%存活。凍融細胞一般為(wei) 50%~80%存