人血小板衍生生長因子BB（PDGF-BB）檢測試劑盒技術答疑

上海信帆生物銷售“人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)檢測試劑盒"，采用進口材料生物試劑，靈敏度好，穩定性高，操作簡單，並且可以提供免費代測服務，歡迎。人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)檢測試劑盒。

ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(ge) 環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。上海信帆生物將操作中各個(ge) 環節常出現問題的原因及解決(jue) 辦法總結於(yu) 下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。

下麵分析elisa試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因，並給出相應的解決(jue) 辦法：

1 選擇試劑選擇質量優(you) 良的檢測試劑，嚴(yan) 格按照試劑說明書(shu) 進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鍾。

2 加樣可能原因：1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長；3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決(jue) 辦法：1）標本為(wei) 血清：將血液先自然存放1-2小時後，再用3000rmp離心15分鍾；標本為(wei) 血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血後必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間後，3000rpm離心15分鍾；若在幾天內(nei) 檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置於(yu) -20℃的低溫冰箱內(nei) 。2)加樣後及時放入孵箱。3)加酶試劑後用吸水紙在酶標板表麵輕拭吸幹。4)如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他後處理儀(yi) 器加酶試劑。5)標本較多時，請分批操作。

3 孵育可能原因：1)孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附於(yu) 孔壁，難於(yu) 清洗*；2)孵育時間人為(wei) 延長，導致非特異性結合緊附於(yu) 反應孔周圍，難以清洗*。解決(jue) 辦法：1)貼封片或加蓋；2)按說明步驟嚴(yan) 格控製操作時間。

4 洗板可能原因：1)采用手工洗板，孔與(yu) 孔之間液體(ti) 交叉。2)采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。3)反應板過多造成洗板等待時間長。解決(jue) 辦法：1)保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後在吸水紙上輕輕拍幹；2)合理安排，或多用幾台洗板機。

5 顯色可能原因：1)顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑；2)加顯色劑時濺出孔外造成液體(ti) 回流。解決(jue) 辦法：1)顯色劑盡量在臨(lin) 用前配製，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；2)加樣時保持顯色劑不外流；3)A、B液應避免接觸金屬器械。

6 終止可能原因如加終止液時產(chan) 生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chan) 生氣泡。

7 讀板如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。

所以在整個(ge) 操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。

在實際操作中，除了選擇優(you) 良試劑外，必須嚴(yan) 格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nei) 質控、室間質評，以嚴(yan) 謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內(nei) 已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀(yi) ，這對於(yu) 實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。

ky体育在线登陆的操作要點：

的試劑，良好的儀(yi) 器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體(ti) 的形成不同而有所差異，國內(nei) 醫學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個(ge) 操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與(yu) 特殊儀(yi) 器配合應用，兩(liang) 者均有詳細的使用說明，嚴(yan) 格遵照規定操作，必能得出準確的結果。

一、標本的采取和保存

可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體(ti) 液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體(ti) 或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為(wei) 標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等於(yu) 血清。製備血漿標本需借助於(yu) 抗凝劑，而血清標本隻要待血清自然凝固、血塊收縮後即可取得。除特殊情況外，在醫學檢驗中均以血清作為(wei) 檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會(hui) 釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為(wei) 標記的ELISA測定中，溶血標本可能會(hui) 增加非特異性顯色。

血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌汙染，菌體(ti) 中可能含有內(nei) 源性HRP，也會(hui) 產(chan) 生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nei) 測定的血清標本可放置於(yu) 4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解後，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾，澄清後再檢測。反複凍融會(hui) 使抗體(ti) 效價(jia) 跌落，所以測抗體(ti) 的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。

二、試劑的準備

按試劑盒說明書(shu) 的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用於(yu) 洗滌的，應為(wei) 新鮮的和高質量的。自配的緩衝(chong) 液應用pH計測量較正。從(cong) 冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與(yu) 室溫平衡後使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

三、加樣

在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，並注意不可濺出，不可產(chan) 生氣泡。加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉汙染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋後再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然後在微型震蕩器上震蕩1分鍾以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。

四、保溫

在ELISA中一般有兩(liang) 次抗原抗體(ti) 反應，即加標本和加酶結合物後。抗原抗體(ti) 反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為(wei) 溫育(incubation)，有人稱之為(wei) 孵育，在ELISA中似不恰當。

ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體(ti) 的結合隻在固相表麵上發生。以抗體(ti) 包被的夾心法為(wei) 例，加入板孔中的標本，其中的抗原並不是都有均等的和固相抗結合的機會(hui) ，隻有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與(yu) 抗體(ti) 接觸。這是一個(ge) 逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其後加入的酶標記抗體(ti) 與(yu) 固相抗原的結合也同樣如此。這就是為(wei) 什麽(me) ELISA反應總是需要一定時間的溫育。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體(ti) 結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩(liang) 次抗原抗體(ti) 反應一般在37℃經1-2小時，產(chan) 物的生成可達。為(wei) 加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體(ti) 反應4℃更為(wei) *，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過一夜，以形成zui多的沉澱。但因所需時間太長，在ELISA中一般不予采用。

保溫的方式除有的ELISA儀(yi) 器附有特製的電熱塊外，一般均采用水浴，可將ELISA板置於(yu) 水浴箱中，ELISA板底應貼著水麵，使溫度迅速平衡。為(wei) 避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水麵上。若用保溫箱，ELISA板應放在濕盒內(nei) ，濕盒要選用傳(chuan) 熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui後將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴(yan) 格限製在規定的範圍內(nei) ，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體(ti) 操作時可根據說明書(shu) 的要求控製溫育。室溫溫育時，ky体育在线登陆板隻要平置於(yu) 操作台上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。為(wei) 保證這一點，一個(ge) 人操作時，一次不宜多於(yu) 兩(liang) 塊板同時測定。