人瘦素（Lep）ky体育在线登陆操作原理大揭秘：間接法測抗體

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基本方法的操作如下:1．將病原體(ti) 的抗原在碳酸鹽緩衝(chong) 液中4~C過一夜包被，形成固相抗原，洗滌去除未與(yu) 固相結合或結合不緊的抗原後，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結合的部分及雜質。2．加入含待測抗體(ti) 的研究樣本如血清等，溫育一定時間後洗板；此時，待測抗體(ti) 就會(hui) 與(yu) 固陽上特異抗原反應而吸附於(yu) 固相上。3．加入酶標記的抗人IgG抗體(ti) ，溫育一定時間後洗板；此時，在固相上即形成固相抗原—待測抗體(ti) —酶標二抗複合物。4．加入酶底物，溫育顯色測定(圖2—6)。間接法測抗體(ti) 在目前應用zui多的是丙型肝炎病毒抗體(ti) (抗HCV)、人免疫缺陷病毒抗體(ti) (抗HIV)以及梅毒螺旋體(ti) 抗體(ti) 等的測定。從(cong) 上述的測定模式可見，間接法測抗體(ti) ，嚴(yan) 格地講，所測定的僅(jin) 為(wei) 抗體(ti) 的IgG類，不涉及IgM和IgA類，這是由酶標二抗體(ti) 所決(jue) 定的。影響間接法測定抗體(ti) 的一個(ge) 較大的因素是包被抗原的純度。現在間接法測抗體(ti) 中所使用的抗原一般均為(wei) 基因工程重組抗原，如HCV的NS3，NS4，NS5，HIV的gp41和gpl20和梅毒螺旋體(ti) TpNl5，TpNl7，TpN47等。基因工程抗原在純化時應盡量去除用來表達的宿主如大腸杆菌的抗原，以免由於(yu) 機體(ti) 存在對這種宿主抗原的抗體(ti) 而引起假陽性反應。此外，由於(yu) 機體(ti) 的IgG類抗體(ti) 濃度較高，其中絕大部分為(wei) 機體(ti) 接觸外界環境刺激所產(chan) 生的非特異IgG，因此，為(wei) 避免這些高濃度非特異IgG對固相的吸附所致的假陽性反應，通常需對待測樣本做一定程度的稀釋。

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