上海信帆為大家提供：ky体育在线登陆的詳細操作步驟

上海信帆生物代理銷售ky体育在线登陆，現在我們(men) 就把ELISA的操作步驟詳細的向大家介紹一下，希望對大家有所幫助。

操作步驟: 
1.     包被過程(注意設置空白對照,陰性對照):
將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為(wei) 每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl, 置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體(ti) .(為(wei) 避免蒸發,板上應加蓋或將板平放在底部有濕紗布的金屬濕盒中)
2.     封閉酶標反應孔:
5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應孔,並去除各孔中的氣泡,封閉結束後用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
洗滌方法:吸幹孔內(nei) 反應液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸幹孔內(nei) 液,傾(qing) 去液體(ti) 後在吸水紙上拍幹，洗滌次數3次
3.     加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):
檢測時一般采用1:50-1:400的稀釋度, 應采用較大稀釋體(ti) 積進行,一般保證樣品吸取量>20μl.
將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中,每樣品至少加雙孔, 每孔100μl,置於(yu) 37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.
4.     加入酶標抗體(ti) :
酶標抗體(ti) : 根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行. 37℃,30-60min之間.短於(yu) 30min往往結果不穩定.每孔加100μl.洗滌同前。
5.     加入底物液(現用現配):
TMB-過氧化氫尿素溶液,OPD-過氧化氫底物液係統次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鍾,加入終止液顯色.
6.     終止反應:
每孔加入終止液50μl終止反應,於(yu) 20min內(nei) 測定實驗結果.
7.     結果判斷:
OPD顯色後采用492nm波長,TMB反應產(chan) 物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首*行空白孔係統調零.用測定標本孔的吸收值與(yu) 一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示,當P/N大於(yu) 2時作為(wei) 抗體(ti) 的效價(jia) .(數值的大小依具體(ti) 檢測要求而定.)