基質金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測試劑盒,明膠酶譜法注意事項

     基質金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測試劑盒,明膠酶譜法注意事項

      上海信帆生物代理銷售“基質金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測試劑盒?"，谘詢！

      我們(men) 在做明膠酶譜法實驗的時候，總是會(hui) 遇到很多這樣那樣的問題，那麽(me) 這個(ge) 基本原理是什麽(me) ，我們(men) 操作過程中應該注意哪些問題呢，上海信帆生物為(wei) 您答疑。

      酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1％明膠）電泳分離，然後在有二價(jia) 金屬離子存在的緩衝(chong) 係統中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢複活性，在各自的遷移位置水解凝膠裏的明膠，zui後用考馬斯亮藍將凝膠染色，再脫色，在 藍色背景下可出現白色條帶，條帶的強弱與(yu) MMP-2和MMP-9活性成正比。
 
        複性原理：在電泳過程中，SDS與(yu) 樣品中的MMPs結合（當然是可逆性結合），破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發揮其分解明膠的作用，而隻有當將膠置Trition中洗脫（是放在搖床上搖，30min／次，做2次或15min/次，4次。靜置於(yu) Trition中是不妥的。）時，由於(yu) SDS被Trition結合而去除，從(cong) 而使MMPs恢複了活性。

操作注意事項：

1.試劑盒的操作方法同WB是一樣的

2.試劑盒的陽性對照，是選用全血做對照，具體(ti) 如下操作如下：

陽性對照（可選步驟）：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血與(yu) 100μl 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer等體(ti) 積混合，取5-15μl上樣。

3.在操作孵育的時候，建議孵育5小時

4.本試劑盒可以檢測MMP2/9活性，同時可以測定PROMMP2/9，可根據實驗需要，選取觀察。

5.本試劑盒上樣蛋白建議20ug。

?