ELISA實驗中，顯色和比色的注意事項

大家在做ELISA實驗的時候，難免遇到顯色和比色的問題，上海信帆生物為(wei) 大家詳細講解顯色和比色的問題。

TMB 經HRP 作用後，約40 分鍾顯色達，隨即逐漸減弱，至2 小時後即可*消退至無色。TMB 的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑製劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24 小時)不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會(hui) 使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。酶標比色儀(yi) 簡稱酶標儀(yi) ，通常指於(yu) 測讀ELISA 結果吸光度的光度計。酶標儀(yi) 的主要性能指標有：測讀速度、讀數的準確性、重複性、度和可測範圍、線性等等。優(you) 良的酶標儀(yi) 的讀數一般可到0.001，準確性為(wei) ±1%，重複性達0.5%。酶標儀(yi) 不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15 -30℃ ，使用前先預熱儀(yi) 器 15-30 分鍾，測讀結果更穩定。

測讀 A 值時，要選用產(chan) 物的敏感吸收峰，如OPD用492nm 波長。有的酶標儀(yi) 可用雙波長式測讀，即每孔先後測讀兩(liang) 次，*次在zui適波長(W1)，第二次在不敏感波長(W2)，兩(liang) 次測定間不 移動ELISA 板的位置，zui終測得的A 值為(wei) 兩(liang) 者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光幹擾。

肉眼判斷結果時，顯色淺不易觀察，影響結果的準確性，必須使用酶標儀(yi) 檢測，以保結果一致性。

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