教你如何配置ky体育在线登陆實驗中的封閉液等常用試劑

      ELISA試劑盒說明上寫(xie) 封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點，蔗糖封閉的原理：

1、ELISA實驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;

2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附（包被）的蛋白，起到“保護劑”的作用。

4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經過BSA封閉後加，當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗後來驗證。但多數選擇前者。

封閉劑還可用5%的脫脂乳（市售即可），0.4%的明膠，但是實驗表明前者比較好，後者不容易洗幹淨未結合上的明膠。

封閉劑的原理就是與(yu) 酶聯板上未結合抗原或抗體(ti) 的微孔中用封閉劑封閉上，結合抗體(ti) 或抗原的時候就不會(hui) 產(chan) 生非特異結合了，不會(hui) 影響實驗的準確度。

tween的作用：雖然不能單獨封閉，但和BSA在封閉時會(hui) 起到清洗非特異性結合或結合不牢固的蛋白的作用，假如抗體(ti) 包被在板上會(hui) 出現YY-

附件：ELISA實驗中緩衝(chong) 溶液等試劑的配置

ELISA實驗中是以抗原和抗體(ti) 的免疫反應為(wei) 基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：（1）　ELISA實驗包被緩衝(chong) 液（2）　ELISA實驗洗滌緩衝(chong) 液（2）　ELISA實驗洗滌緩衝(chong) 液（3）　ELISA實驗稀釋液;（4）ELISA實驗終止液（5）ELISA底物緩衝(chong) 液（6）ELISA實驗TMB（四甲基聯苯胺）使用液（7）　ELISA實驗ABTS使用液（8）ELISC。

試劑

（1）　ELISA實驗包被緩衝(chong) 液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩衝(chong) 液）:

NaHCO3 1.59克

NaHCO3　 2.93克

加蒸餾水至1000ml

（2）　ELISA實驗洗滌緩衝(chong) 液（PH7.4 PBS）：0.15M

KH2PO4 　　　　 　0.2克

Na2HPO4·12H2O　　2.9克

NaCl　　　　　 　　8.0克

KCl　　　　　　　 　0.2克

Tween-20　0.05%　 0.5ml

加蒸餾水至1000ml

（3）　ELISA實驗稀釋液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

加洗滌緩衝(chong) 液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與(yu) 洗滌液配成5～10%使用。

（4）　ELISA實驗終止液（2M　H2SO4）：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

（5）　ELISA底物緩衝(chong) 液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

0.2M Na2HPO4（28.4克/L） 25.7ml

0.1M 檸檬酸（19.2克/L）　　　　　 24.3ml

加蒸餾水50ml。

（6）　ELISA實驗TMB（四甲基聯苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml無水乙醇） 0.5ml

底物緩衝(chong) 液（PH5.5）　　　 10ml

0.75%H2O2 32μl

（7）　ELISA實驗ABTS使用液:

ABTS　　　　　　　　0.5mg

底物緩衝(chong) 液（PH5.5）　 1ml

3%H2O2 2μl

（8）ELISA實驗封閉液：

牛血清白蛋白（BSA） 5克

加洗滌緩衝(chong) 液至100ml。

值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

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為(wei) 了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩衝(chong) 液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個(ge) 酶標孔，嚴(yan) 防交叉汙染。