ky体育在线登陆研究----DNA氧化損傷產物8-OHdG在終末期腎病表達

     經研究證實，終末期腎病（ESRD）患者存在氧化損傷(shang) 增強。ESRD患者體(ti) 內(nei) 某些細胞因子（IL-1、IL-6、TNF等）分泌增加，可使中性粒細胞、單核-巨噬細胞等炎症細胞的呼吸爆發活動增強，活性氧（ROS）和活性氮（RNS）大量生成。

       ROS和RNS可攻擊細胞內(nei) 任何結構和物質，包括：DNA。DNA氧化損傷(shang) 產(chan) 物中，作為(wei) DNA中脫氧鳥苷（dG）的羥基加合物，8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）因其形成量大，影響因素少，已被*為(wei) zui能反映體(ti) 內(nei) DNA氧化損傷(shang) 程度的生物標誌物。然而目前對ESRD的DNA的氧化損傷(shang) 研究尚少。本研究通過檢測血清中的8-OHdG含量來了解ESRD患者體(ti) 內(nei) DNA氧化損傷(shang) 程度，同時研究不同病因（慢性腎小球腎炎和糖尿病）所致ESRD在DNA氧化損傷(shang) 程度上是否有差別，以及血液透析和抗氧化治療對DNA氧化損傷(shang) 的影響。本研究還檢測了ESRD患者一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）的含量，並通過與(yu) 8-OHdG比較，來了解DNA氧化損傷(shang) 與(yu) 其他物質氧化損傷(shang) 的相關(guan) 性。以此達到探討ESRD患者體(ti) 內(nei) 氧化損傷(shang) 的機製，並為(wei) ESRD的抗氧化治療提供理論依據的目的。 實驗材料與(yu) 方法 一、實驗材料 1．主要試劑與(yu) 儀(yi) 器 8-OHdG ky体育在线登陆購自日本防老化研究所（Japan Institute For The Control Of Aging）；鎘顆粒購自上海化學試劑站；722光柵分光光度計（上海第三分析儀(yi) 器廠）；酶標儀(yi) （芬蘭(lan) 產(chan) ，Multi-skan Ascent牌） 二、實驗方法 二．研究對象： 分四組，每組10例。除正常對照組外，其餘(yu) 三組為(wei) 實驗組。*組為(wei) 正常對照組。第H組為(wei) 慢性腎小球腎炎導致ESRD未接受血液透析治療組＊N非透析組人第三組為(wei) 糖尿病導致ESRD末接受血液透析治療組pM非透析組八第四組為(wei) 慢性腎小球腎炎導致ESRD接受血液透析治療組＊N透析組人 以上各組除第四組外，所有受檢者均要求無吸煙史，無腫瘤病史；近一月無感染史，近一月無口服VOVD鐵劑史。第四組均為(wei) 接受血液透析治療三個(ge) 月以上，要求除口服VOV卜鐵劑史外，其餘(yu) 同其他三組。 2．檢測方法： 8－OHdG檢測采用 ky体育在线登陆法，依次加人*抗體(ti) 液、第二抗體(ti) 液後，再加人發色劑及反應停止液，然後酶標儀(yi) 波長450run處8－OHdG定量分析。NO采用檢測改良鍍銅輻顆粒還原法。MDA檢測采用硫代巴比妥酸產(chan) 物比色法。 三、統計分析 實驗數據采用SPSS．0統計分析軟件進行描述分析t檢驗及數據相關(guan) 分析，數據以 i幻表示，p＜0．05為(wei) 統計學有意義(yi) 。 結 果 一、各組間血清 8－OHdGJDA和 NO測量值 l．各組的血清8－OHdG水平 GN非透組刀M非透組人N透析組血清中8—OHdG水平均顯著高於(yu) 正常對照組，p＜0．0L但各實驗相比鰍顯著差異，p＞0．05。 ·2·． 2．各組的血清MDA水平 GN非透組山M非透組血清中MDA水平均顯著高於(yu) 正常對照組，p＜0．of。實驗組中 GN非透組與(yu) GN透析組相比差異顯著，P＜0．01。 3．各組的血清NO水平 GN非透組山M非透組血清中NO水平均顯著高於(yu) 正常對照組，其中＊N非透組對比正常對照組p＜o．o＼＊M非透組與(yu) 正常對照組比 p＜0．05。但 GN非透組的 NO水平明顯高於(yu) DM非透組，差異顯著，p北·01。 二、不同氧化損傷(shang) 指標與(yu) 肌酥的相關(guan) 分析 l．血清8－OHdG值同NO和o值呈正相關(guan) ，相關(guan) 係數分別為(wei) 0．379和0．596。其中 8－OHdG值和 Cr值呈較強正相關(guan) ，P＜0．of。 2．血清 NO值與(yu) Cr值呈正相關(guan) ，相關(guan) 係數為(wei) 0．378，P＜0．05。 討 論 關(guan) 於(yu) DNA氧化損傷(shang) 的研究是近幾年才開展起來的。在DNA氧化損傷(shang) 產(chan) 物中，8－OHdG產(chan) 生量zui多。8－OHdG為(wei) DNA中 dG的羥基（·OH）加合物。。OH的生成方式主要是Fenton反應（H。O。＋Fe‘“一＋HO＋Fe’”＋·OH），其中鐵離子發揮著重要作用。以前8—OHdG的檢測複雜，費用昂貴，限製了8－OHdG的應用。1997年日本防老化研究所研究出 ELISA方法檢測 8－OHdG，可直接檢測血清中的8－OHdG含量，大大地提高了8－OHdG作為(wei) 一個(ge) DNA氧化損傷(shang) 指標的應用，本研究也是基於(yu) 此方法研究ESRD中 DNA氧化損傷(shang) 水平。 我們(men) 的研究結果顯示在ESRD患者8－OHdG水平明顯高於(yu) ·3·正常對照組。而且8－OHdG同患者體(ti) 內(nei) Cr水平明顯正相關(guan) ，說明ESRD患者DNA氧化損傷(shang) 增強是腎功能衰竭的結果。ESRD患者有多種因素導致Fenton反應增強。這些因素包括：ESRD患者促紅細胞生成素減少等原因導致鐵的利用減少和轉運障礙。鐵元素蓄積；患者營養(yang) 不良、蛋白合成減少、體(ti) 內(nei) 微量元索硒重度減低等原因，導致GSH－PX和GSH抗氧化係統功能低下，體(ti) 內(nei) ·OH清除減少；SODJO＊抗氧化物缺乏等。

    本研究發現GN非透組和DM非透組之間8—OHdG的水平無差別，這與(yu) 目前的一些研究結果不同。之所以不同的原因，我們(men) 考慮可能是因為(wei) 檢測標本有差別。（轉自 論文網）