農殘檢測ky体育在线登陆研究

    本研究以農(nong) 藥三唑磷及克百威為(wei) 研究對象，采用分子模擬方法對其半抗原分子進行了設計並合成得到了兩(liang) 種優(you) 化的三唑磷半抗原兩(liang) 種半抗原O-乙基，O-[1-苯基-（H-1,2,4-三唑-3-基），N-（3-羧基-丙基）]硫代磷酸胺（THBu）、O-乙基，O-[1-苯基-（H-1,2,4-三唑-3-基）,N-（5-羧基-丙基）]硫代磷酸胺（THHe）和一種克百威半抗原4—[[（2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯並呋喃基氧）羰基]氨基]丁酸（BFNB）。上述半抗原分別與(yu) 載體(ti) 蛋白偶聯製備成人工抗原，免疫小白鼠，再采用雜交瘤技術製備出了對應單克隆抗體(ti) 。經測定，抗體(ti) （腹水）的效價(jia) 均在10~6以上，與(yu) 對應農(nong) 藥的結構類似物的交叉反應率均較低，表現出很高的特異性。 在此基礎上，通過對固相載體(ti) 、包被緩衝(chong) 液、有機溶劑、包被條件、洗滌次數、酶的種類、封閉物種類、點板時間、工作濃度、穩定劑以及不同ELISA模式等因素的篩選比較，優(you) 化了三唑磷和克百威ELISA方法和條件。優(you) 化後結果顯示：Costar酶標板（美國）吸附效果和均一性較好；抗體(ti) 以PBS（pH 7.4，0.01M）作為(wei) 包被介質較為(wei) 理想，人工抗原則以CBS（pH 9.5，0.05M）作為(wei) 包被介質較為(wei) 理想；包被條件以在37℃下包被2h效果為(wei) 佳；反應介質加入2％牛奶可減少非特異性吸附，提高檢測靈敏度；有機溶劑中甲醇對ELISA反應的影響較小，反應體(ti) 係中zui終含量10％為(wei) 佳；HRP酶作為(wei) 顯色反應的催化劑比AP酶更為(wei) 理想；包被抗原直接競爭(zheng) ELISA模式OD值的平行性不如包被抗體(ti) 直接競爭(zheng) ELISA模式的好；優(you) 化出的穩定劑可使包被在酶標板上的抗體(ti) 在37±1℃條件下保存14天而抗體(ti) 活性基本保持不變。 利用優(you) 化後的分析條件，建立了農(nong) 藥三唑磷異源直接競爭(zheng) ELISA方法（包被抗體(ti) 模式）和克百威直接競爭(zheng) ELISA方法（包被二抗模式）。在考察了不同樣品基質對ELISA方法的影響後，進一步對蔬菜樣品、水果樣品、水、土等環境樣品進行了三唑磷和克百威添加回收率試驗，檢測結果進行了統計分析，考察了方法的準確度與(yu) 精密度，並對不同處理組間、相同處理組板間的檢測數據進行了顯著性檢驗，確定了不同樣品的方法本底值、zui低檢測限及檢測結果陰性／陽性判定方法，zui終構建了三唑磷ELISA快速測定試劑盒和克百威ELISA快速測定試劑盒。結果表明，三唑磷ELISA方法的檢測靈敏度達到了2.66 ng／mL（檢測線性範圍為(wei) 1.95-2000ng／mL），克百威ELISA方法的檢測靈敏度為(wei) 0.97 ng／mL（檢測線性範圍為(wei) 0.8-340 ng／mL），實際樣品中的zui低檢測限達到或接近（部分超過）了一些國家和地區的殘留*（MRL）標準。 通過本課題的研究，在國內(nei) 外研製出了三唑磷半抗原、抗三唑磷單克隆抗體(ti) 及其ky体育在线登陆；在國內(nei) 研製出了抗克百威單克隆抗體(ti) 及其ky体育在线登陆；在國內(nei) 係統建立了農(nong) 藥等小分子化合物ELISA快速測定試劑盒國產(chan) 化生物試劑的技術體(ti) 係。試製的試劑盒產(chan) 品經農(nong) 業(ye) 部農(nong) 藥檢定所、農(nong) 業(ye) 部環境質量監督檢驗測試中心（天津）、等5家檢測機構應用，證明該技術可靠，產(chan) 品質量和性能穩定，可用於(yu) 指導生物試劑。（轉自 論文網）