ELISA方法 捕獲HCMV pp65特異性IgM抗體檢測病毒活動性感染

  建立ELISA抗體(ti) 捕獲法用於(yu) 檢測HCMVpp65特異性IgM，以確定感染狀態，為(wei) HCMV活動性感染診斷試劑盒的研發提供理論和實驗依據。方法：將HCMVAD169株感染HF細胞，粗提HCMV抗原；通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）和Western-blotting篩選出HCMVpp65抗原，測定pp65抗原效價(jia) 及其和特異性抗體(ti) 的親(qin) 和力：用辣根過氧化物酶（HRP）標記HCMVpp65單克隆抗體(ti) （McAb）。通過抗人μ鏈包被微量滴定板，先後加待檢血清和pp65抗原-酶標McAb複合物，建立ELISA捕獲HCMVpp65特異性IgM抗體(ti) 方法學。用該法檢測30份兒(er) 童、30份孕婦和28份免疫缺陷者的研究血清樣本，並用DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測試劑盒同步檢測。結果：製備的HCMV-pp65抗原PAGE膠上位於(yu) 65KD Marker處，呈單一條帶，抗原效價(jia) 為(wei) 1：100；HRP-MCAb免疫雙擴效價(jia) 為(wei) 1：32；檢測係統各反應物的*稀釋度為(wei) 抗人μ鏈0． 75μg／孔，待檢血清為(wei) 1：100，HCMV抗原為(wei) 1：100，HRP-McAb 1：20：兩(liang) 種方法的各組陽性率分別為(wei) 6． 7％、13． 3％、10． 7％和10％、13． 3％、14． 3％，總符合率為(wei) 91％。結論：建立了簡便、快捷、特異性和敏感性均較高的ELISA捕獲HCMV pp65特異性IgM抗體(ti) 法，其檢測結果與(yu) DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測試劑盒的總符合率為(wei) 91％。可用於(yu) 兒(er) 章、孕婦和免疫力低下者，診斷HCMV活動性感染。