豬ky体育在线登陆包被夾心法在抗原定量測定中的應用

       我們(men) 為(wei) 大家介紹一下豬的ky体育在线登陆在測試抗原定量中的應用。用豬瘟病毒中國免化弱毒疫苗株（CSFV C株）為(wei) 實驗材料,首先采用常規細胞實時計數的方法,得到正常犢牛睾丸細胞增殖曲線和帶毒睾丸細胞的增殖曲線,結果發現豬瘟病毒不僅(jin) 不影響犢牛睾丸細胞的生長,反而促進細胞的分裂增殖,培養(yang) 48小時時,帶毒的牛睾丸細胞計數是未帶毒細胞的117.5%。初步確立了該毒株在原代犢牛睾丸細胞中增殖的規律與(yu) 基本特性。

         再進一步運用直接免疫熒光法確定出*細胞初始密度、*接毒量及接毒方式的產(chan) 毒模型,建立了常規的病毒增殖曲線。 以建立的細胞及病毒生長曲線及產(chan) 毒模型為(wei) 依據,根據GMP生物試劑車間的實際情況,從(cong) 生物試劑種毒繁殖、原代細胞製備、CSFV的感染、CSFV感染後維持液的調節以及帶CSFV的犢牛睾丸細胞的多次傳(chuan) 代這幾個(ge) 對CSFV增殖有影響的因素方麵入手進一步展開工作。 嚴(yan) 格控製生物試劑種毒,達標的生物試劑種毒,是疫苗病毒含量達標的必要保障。原代細胞製備過程中,依據《中華人民共和國獸(shou) 用生物製品規程》（以下簡稱:《規程》）無菌摘取犢牛睾丸,在《規程》的指導基礎上,調整消化時間、溫度可以同時達到提高細胞數量及質量的雙重效果。將《規程》消化時間調整為(wei) 0.25%的胰酶37℃消化30 min後降低溫度繼續消化。結果,每1g睾丸組織可製備3×105個(ge) /ml細胞懸液400-500ml,是傳(chuan) 統消化法的兩(liang) 倍,並且細胞活力明顯增強,消化後期降低溫度可減輕後期胰酶的作用強度,減少對已消化好細胞的傷(shang) 害。 脾組織毒對次代牛睾丸細胞有很強的刺激作用,生物試劑接毒時適度減少組織毒,同時補入一定量病毒含量≥106細胞毒液,可減少組織毒對細胞的刺激作用,降低細胞的脫瓶率,提高病毒液的收次。 在病毒液收獲期間,增大維持液量,將《規程》中10%的維持液調節為(wei) 20%,4天收獲一次延長為(wei) 8天收獲一次,經兔體(ti) 檢驗,病毒含量仍能達到5×104ml。病毒含量測定方麵,應用豬瘟抗原/血清ky体育在线登陆（IDEXX HerdCheck Co.）對經兔體(ti) 檢驗已知滴度的20份HCLV半成品細胞病毒液、10份兔體(ti) 檢驗檢驗陰性HCLV半成品細胞病毒液、10份凍幹成品疫及10份凍幹脾淋苗進行抗原含量測定,並與(yu) 兔體(ti) 定型熱反應法的結果進行對照,結果半成品檢測結果與(yu) 兔體(ti) 檢驗相關(guan) 率可達95%,成品75%。ELISA法可快速、穩定、簡單地運用於(yu) HCLV細胞苗的半成品與(yu) 成品的病毒含量測定,並可反向檢測兔體(ti) 檢驗的不敏感性,降低檢驗誤判,同時提高產(chan) 品的質量及產(chan) 量。