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更新時間：2023-06-01 
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1跑page膠的時候，小電壓跑會(hui) 避免高電壓產(chan) 生的熱量爾導致的膠層變形。低電壓泳道會(hui) 比大電壓泳道跑的直一些，且分離效果更高，有利於(yu) 分子量相差不大的蛋白分離。
2. 提取質粒的時候，zui後一步的酒精揮發很關(guan) 鍵，基本上是其後續的酶切反應的決(jue) 定性因素。所以這一步盡量揮發長一點時間，是空調吹熱風，或是37度溫箱放長一點的時間，我試過室溫過夜，酶切很好。
3. 做WESTERN BLOT 的時候，大家往往會(hui) 摸索一抗、二抗的濃度，封閉時間，曝光時間等等，而每次變換其中的一個(ge) 條件就需要從(cong) 新跑膠、轉膜，甚至重新提蛋白，這樣會(hui) 浪費大量的時間。其實*沒有必要這樣。一次轉膜後，將PVDF膜晾幹，裁減成小塊，保存起來，用的時候取出一塊，沒有任何影響。這對於(yu) 摸索條件的戰友來說，節約了大量的時間。
4. 有關(guan) 緩衝(chong) 液和培養(yang) 基配置
1）將緩衝(chong) 液配方中的成分分別以10－100倍配成母液儲(chu) 存，需要的時候隻需將相應的母液混合，補加水稀釋即可
2）配培養(yang) 基時通常會(hui) 忘記各成分的量，如配LB時的三個(ge) 成分不記得到底哪個(ge) 是5g，哪個(ge) 要10個(ge) ，因此可以在常用的試劑瓶的標簽上注明所需的量，如配LB時，在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很方便，不需要每次配之前臨(lin) 時翻書(shu)
5. 有關(guan) PCR主反應液配置:
在做克隆鑒定的時候經常需要在酶切鑒定前進行PCR鑒定，每次配置PCR反應液很繁瑣，可以將其配置類似kit的形式，按你需要的反應體(ti) 係列表，然後放大100倍配置100×主反應液（100次反應），其中含buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和Taq酶，然後可以10×分裝或一管儲(chu) 存在－20度，在需要的時候拿出融開，然後按所需的PCR反應個(ge) 數吸取相應的倍數，再補加相應反應倍數的Taq和引物，混勻後分裝，這樣做的好處如下：
1）可極大的節省寶貴的時間，可早點收工，看球
2）避免每次反應加樣不均的可能
3）大大減少PCR假陽性的產(chan) 生
6. 有關(guan) 酶切反應液的配置:
在做酶切時，也可以象PCR一樣配置主反應液，每次反應前先列好反應的體(ti) 係，算好需要的反應數，然後按所需反應的體(ti) 係按所需反應數放大，加入buffer、酶、水，質粒欄空缺，然後混合後按除質粒DNA的體(ti) 積分裝，然後再在每管中加入相應體(ti) 積的質粒DNA酶切，這樣做的好處如下，特別是當同時有10幾個(ge) 陽性克隆需要鑒定時尤為(wei) 明顯：
1）各反應成分均一
2）可大大減少限製型內(nei) 切酶的使用
3）節省時間
7. 有關(guan) SDS－PAGE：
1）可將SDS－PAGE的積層膠，分離膠預先配好大體(ti) 積如100ml儲(chu) 存在4度冰箱（注：10％AP，TEMED不加，切記！！！），每次配置時隻需吸取相應體(ti) 積的預製膠加入AP，TEMED即可，沒必要每次製膠時候翻分子克隆，特別方便，而且，這樣的預製膠可儲(chu) 存半年以上，不失為(wei) 偷懶的方法；更關(guan) 鍵的是可大大減少與(yu) 丙稀酰胺的接觸，因此大大減少中毒的機會(hui) 。
2）電泳時雖然小電泳分離效果要好一些，但2小時以上的等待的時間實在是痛苦，因此可以提高電泳至150V，但需要將整個(ge) 電泳槽放在放滿冰水的臉盆裏散熱，這樣跑出來的膠分離效果絲(si) 毫不比低電壓來的差，關(guan) 鍵是時間大大節省，不需1h即可看結果了
8. 實驗中小竅門我想能夠分成兩(liang) 類：一類是“非常規"操作；一類是常規操作過程中一些省時省事手段。
前一類，我舉(ju) 個(ge) 例子：有時候*天塗的轉化平板、次日早晨轉化子可能長成的菌落比較大（1~2毫米以上，BL21就長得快），下一步轉化子做質粒鑒定。這個(ge) 情況下可以直接挑取一塊菌苔（勿帶出培養(yang) 基），50微升酚/氯仿懸浮菌體(ti) ，放置兩(liang) 分鍾，加40微升TE抽提，上層TE吸出後再氯仿抽提一次，吸取上層TE即是質粒提取液。提取的質粒可以直接用於(yu) 電泳和酶切。這樣操作，可以省去轉接液體(ti) 試管的培養(yang) 步驟，至少節省6~8小時的時間。但是，要在各步驟都控製得很好的情況下才能保證提取和酶切的效果，不同的實驗室或者操作者未必能夠很方便地重複----其實，其它的一些“小竅門"也是如此。
後一類的小竅門則在實驗室中無處不在。如：平行作不同樣本的PCR,模板DNA加量一樣，配置PCR體(ti) 係可以一起配製後分裝----這點做過試驗的都知道，但是配製的時候配製量可以比預期分裝量稍多一點（如用100微升則配110微升），這樣可以避免有時候分裝不夠的尷尬，因為(wei) 不同特別是大小不同的槍，會(hui) 有誤差。再比如：樓上有站友說的sds-page膠預配（APS和TEMED、或者後者先不加）的問題，實際上時間放置過長肯定影響效果，如果要在一天內(nei) 連續地跑兩(liang) 次板，何嚐不可？又比如，配sds-page膠的時候，上層膠和下層膠可以隻用一個(ge) 大槍頭：先取膠，次取水，取6.8的tris後再取8.8的tris，省時省料。
20021108站友開的這個(ge) 帖子很好，在上上層樓的帖子說得也有道理。但我想，“竅門"和“偷懶"不應該是因果關(guan) 係。其實，不管是那一類的小竅門，都是在充分地理解實驗各步驟的原理、經過多次試驗積累、再加上一點點思索然後嚐試的結果。知其然知其所以然和勤於(yu) 思考敢於(yu) 探索，是根本。否則，別人的小竅門對你也未必能夠有用。才進實驗室的新手，務必要先練好規範紮實的操作，然後才能弄“竅門"。本末倒置，貽害無窮。
9. 我一直是把SDS－PAGE的積層膠，分離膠預先配成mixture，APS製膠時加入，半年內(nei) 使用，沒有問題，我保證。
10. 做SDS-PAGE的時候，除了蛋白量上樣一致，體(ti) 積也一致，這樣跑出來的膠各個(ge) 泳道之間的band能做到一樣寬，方便後麵的比較，特別是WB。做法就是拿1X的上樣緩衝(chong) 補全要加的樣做到體(ti) 積一致，否則跑出來會(hui) 有的寬有的窄，特別是上樣體(ti) 積相差較大的。
11. 在把蛋白膠做成幹膠時，很多時候會(hui) 因為(wei) 有氣泡使膠裂掉，我的經驗是在做膠時加上層膜前在膠上多加些水就不容易進氣泡了，還有就是高溫烘膠，我喜歡放到60度烘箱裏烘，這樣水分蒸發速度快，即使有一些小的氣泡也不會(hui) 有影響，嗬嗬，這是經驗之談，我從(cong) 來都沒失手過，大家可以試試
12. 做大腸表達時確定蛋白是否表達一般要煮樣做誘前誘後檢測,但很多時候煮出來的很黏影響跑膠效果.我發現如果現用8M Urea重懸細菌再煮效果會(hui) 有極大改善.
注:不能用Gu-HCl代替
13. 我也推薦幾個(ge) 偷懶的方法
1 做SDS-PAGE跑膠通常都是現配現用,但配膠要>1h,所以如果想第二天睡個(ge) 懶覺而又不耽誤跑膠可以於(yu) 前一天晚上做好濃縮膠和分離膠,待凝聚後不要拔下梳子,把含膠玻璃板從(cong) 製膠槽取下,用保鮮膜包上,注意玻璃板上下兩(liang) 邊緣會(hui) 有氣體(ti) ,所以需要加一點電泳緩衝(chong) 液以避免膠內(nei) 水分蒸發.然後放4度過夜.第二天直接拔下梳子行後續.國外好多公司出售腳既是如此,可以保存上星期.
2 配置分離膠或者非變性膠時因膠凝時收縮可導致加樣孔變淺.可以將加剩的膠放入4度以降低凝聚速度,而將凝膠放入37度促聚,並隨時用4度加剩的膠補充下降的膠麵.另外將膠橫放與(yu) 水平麵成~10度角也可以減少收縮的影響.
3 推薦一個(ge) 節約抗體(ti) /時間的做法:
同時跑2塊膠,同時轉膜,然後兩(liang) 塊膜背靠背放入同一封口膜同時封閉,同時一抗二抗（是用轉輪,這樣效果好.如果是搖床,隔一段時間幫它們(men) 翻個(ge) 身以保證兩(liang) 張膜的正麵都有機會(hui) 與(yu) 液體(ti) 充分接觸.一起洗膜（可以稍微加強洗膜也可以不做.我zui多一張盤子裏放4張膜而沒有影響洗膜）.可分別或同時壓片.這樣就可以節約一半抗體(ti) 和接近一半時間而不會(hui) 影響結果.
或者另外一個(ge) 就是孵育後的抗體(ti) 不要扔,好的抗體(ti) 可以反複做好幾張膜呢.但每次都會(hui) 減弱,效果不如上麵一種方法.
14.做western blotting 轉膜時，膠放在轉膜緩衝(chong) 液中一段時間，待膠在含有甲醇的緩衝(chong) 夜中縮小的差不多後裝好轉膜裝置，我的經驗是把膜印在膠上直接在膜上畫出預染maker條帶，方便的很。因為(wei) 很多時候跑電泳時膠上的預染maker很清楚，等轉膜後就不是分辨的很清楚了。不過要注意畫好預染maker後就不要使膠和膜發生對位移動了，以防maker失去參照價(jia) 值。
15. 超濾zui合適用於(yu) 蛋白的濃縮，更換緩衝(chong) 液和除鹽，對於(yu) 按照分子量進行初分離的效果不是很好，理論和現實是有很大差別的^_^
16. 關(guan) 於(yu) Western Blot
1）器具的清潔非常重要，開始做前，為(wei) 了安全，尤其是裝膠的厚薄玻璃板，可以先用中性洗滌劑和自來水反複衝(chong) 洗，確保無洗滌殘液後用蒸餾水衝(chong) 洗2－3遍，然後用去離子水衝(chong) 洗一遍。zui後用95％酒精再擦一遍後晾幹備用。
2）配膠現用現配，先配下層膠（分離膠），後配上層膠（濃縮膠或積層膠），而且在臨(lin) 灌膠前加APS並迅速混勻，即用移液槍抽吸與(yu) 注入1－2次即可。
17跑蛋白page的時候，一開始用加樣針，太麻煩，發現用20ul槍+普通小白槍頭點，非常省事。另外，點樣時有可能看不清孔在哪，看遠離你的那麵膠，孔有反光的。點樣也點你對麵的那塊膠，省的總低頭，幹咱這行的容易得頸椎呀，愛惜自己。
18. 垂直電泳時，可在電泳糟中放入青黴素小瓶等，可自然使液麵提高而不影響電泳，又很節約電泳緩衝(chong) 液。
19. 我們(men) 有時要沉澱東(dong) 西時，由於(yu) 沉澱量很少，離心完之後不知道到底有沒沉澱下來東(dong) 西，由於(yu) 量很少，不好觀察，所以離心時建議按特定的方向放置離心管，這樣你就可以在離心之前確定沉澱該沉澱到管子的大致部位，這樣離心後就可直接觀察那有沒有沉澱，避免滿管子找，另外看沉澱時可以對光看，這樣就是顆粒狀的細小沉澱也能看見的。
20. 大家都知道PMSF有毒，以前都是知道濃度和要配的體(ti) 積的基礎上,算出要稱多少毫克的PMSF,其實也可以先稱PMSF,稱多少算多少,再調整異丙醇的體(ti) 積，到達你所要的濃度。這樣就避免了你長時間和它接觸。
21. 跑好SDS-PAGE膠的一些體(ti) 會(hui) 。
1. 清洗好玻璃板，不要偷懶，很多時候跑完電泳撬膠時會(hui) 因為(wei) 玻璃板不幹淨膠粘在板上把膠撬破。
2. 配膠時不要反複用槍混，稍微搖混就可以了，用槍混多次會(hui) 導致膠凝不好影響電泳圖的分辨率。
3. AP分裝成500微升一管保存放-20度，避免AP用太久失效。
4. 倒膠時把玻璃板中的水用濾紙盡量吸幹，因為(wei) 微量的水存在會(hui) 影響配的膠濃度。
5. 盡量不用過夜放室溫或者四度的膠，也回影響膠 的分離效果。
6. 電泳完撬膠時根本不需要用撬膠板，在一平皿裏裝好水，把有膠一麵的放在水中晃動幾次膠很容易就脫落下來，一點沒有問題，方便的很。
7. 點樣時樣品別忘了離心這步，因為(wei) 上樣含有固體(ti) 沉澱會(hui) 影響電泳圖分辨效果。
8. 盡量在冰浴狀態下跑。
22. 做 ２－ＤＥ 做的比較多，總結了幾個(ge) 小竅門：
１．一向電泳時，鹽離子容易聚在 膠槽的兩(liang) 側(ce) ．剪一小段ＩＰＧ膠條放在 兩(liang) 側(ce) ，構成鹽橋，電壓就容易上去了．避免一向電泳不好影響zui後實驗 結果．
２． SDS－PAGE時,在灌膠之前,一般大家都會(hui) 用凡士林封底, 在SDS－PAGE
電泳之前又必須把凡士林搽幹淨,很是麻煩,我的經驗是:不用凡士林,取少量未加Ap的分離膠,按比例加2倍量的Ap,然後灌入板間,等上幾分鍾,待膠凝固後就可以接著灌分離膠了.方麵,效果好!
23. 蛋白質純化時，蛋白質降解可能與(yu) 超聲破菌保持冰浴有關(guan) ，之前建議加pmsf，建議在上柱子洗脫的時候也加pmsf（蛋白降解抑製劑），一定要用之前再加。
24. 做透析的時候，拿一個(ge) 5ml的槍頭或者是其他類似的東(dong) 西，剪短，穿過個(ge) 塑料泡沫之類的麵積比燒杯大東(dong) 西，然後把透析帶一端紮緊，另一端開口綁緊在5ml槍頭下端，紮緊得那端也可以彎過來綁成u字型。這樣就可以用1ml的槍穿過5ml的槍頭的孔，另一隻手調整透析帶，來加樣取樣，省去了總綁透析帶的麻煩，對同一個(ge) 蛋白大量多次透析非常方便
25.
1. 配SDS-PAGE膠時，用槍頭混勻比較麻煩，而且費時費力，效果也不好。可以剪一小段夾文件的那種曲針做轉子放到配膠的小燒杯裏，在磁力攪拌器上邊攪邊加入各溶液，這樣加完也就混勻了，直接灌膠即可。
2. 上麵的站友也說過，上樣用黃槍頭就行，我也一直在用，根本不用注射器，方便的很，建議大家也試試。
3.電泳後考馬斯亮藍染色一般要1h到2h，脫色也要2h左右，麻煩的很。現在給大家說一個(ge) 簡單的方法，是我從(cong) 一個(ge) 師姐那裏學到的。
加入染色液後，先放入微波爐裏加熱5-10秒，使染色液微熱即可（千萬(wan) 不要加熱太久，否則冰醋酸就揮發了）。然後放水平搖床上搖20分鍾，zui多半小時就染好了。
脫色也很簡單，不用脫色液，直接用去離子水，放微波爐裏煮沸5分鍾左右，然後將水倒掉，再換上新的去離子水煮，這樣反複幾次，就可以了。效果可能比正常的脫色稍差一點點，不如那樣清楚，隻要電泳時比平時多上1/5的樣品就可以了，關(guan) 鍵是這樣省時省材料（用不著含甲醇和冰醋酸的脫色液）。方便快捷！
放心，反複煮膠不會(hui) 把膠煮壞的。
26.
1、配膠時一定要掌握好時間，不要因為(wei) 過度趕時間，而造成以後的條帶粗大，壓不成條帶，且消耗很多試劑和時間。
2、加樣時，衝(chong) 洗加樣器可用雙蒸水，用電泳液會(hui) 使加樣器中有很多的泡沫。或許是因為(wei) SDS的原因吧？
3、對於(yu) 大分子蛋白質，轉膜過夜更好。濾紙的張數可以適當減少。
4、在跑樣時同時加入MARKER有助於(yu) 正確識別所需的蛋白位置，減少NC膜的消耗。
5、一抗、二抗的濃度不要太高。
6、做ECL顯影時，根據熒光的亮度調整時間。泡完顯影液，膠片應用水洗一下，以減少定影液變黃。
7、和有經驗的同學交流，也是非常重要的。知識的交流有助於(yu) 試驗的成功。
這是我目前的一點拙見。
27. 推薦一個(ge) 省質粒試劑盒矽膠柱與(yu) 溶液的方法：
所有試劑使用手提質粒自己配置的溶液一、溶液二、溶液三（代替試劑盒的solution1、2、3），然後一比一的與(yu) 飽和碘化鉀（代替結合緩衝(chong) 液）混合，就可以讓質粒在矽膠上結合，而試劑盒的矽膠柱可以重複使用，沒有試劑盒溶液量的限製，隻要是一樣的質粒我想提幾管就提多少。
順便說一句矽膠柱也可以用自己買(mai) 的矽膠粉末代替，離心後倒掉矽膠柱上麵的上清就可以，用起來不象柱子方便。效果比手提的要好要快。
28. 做WB時,樣品比較多, 又怕放時間長了對蛋白樣品不好,而且確定以後肯定要做某個(ge) 抗體(ti) ,隻是一時沒有決(jue) 定.那麽(me) 你可以選擇先做SDS-PAGE,並轉膜. 然後把PVDF膜涼幹, 放四度保存. 以後拿出來封閉後,加抗體(ti) 就行了. 蛋白在膜上,且已經分離, 比保存在BUFFER裏麵的蛋白肯定更可靠。嗬嗬
29. 今天作his純化的時候，又琢磨了一個(ge) 竅門，與(yu) 大家分享。我得樣品比較多，幾百ml，而柱子不夠大，隻有10幾ml，跑來跑去的上樣，還總得記著，太麻煩了。於(yu) 是，我就刷幹淨了一個(ge) 燒杯，裝了我的樣品，找了一個(ge) 細膠皮管，當連通器，就像魚缸換水一樣，用5ml槍在一頭一吸，液體(ti) 流出來，放到純化柱裏，調好燒杯的位置，兩(liang) 個(ge) 液麵一樣平了，嗬嗬，上了好幾個(ge) 小時了，沒有問題，現在調低速度，過夜上樣：）
30. 能導致PAGE膠不凝的原因主要有三個(ge) ：
1、配膠中用到的主要試劑的配置。
主要就是30％的丙稀酰胺的配置。粉末狀的丙稀酰胺和甲叉丙稀酰胺使用不應該超過一年，因為(wei) 丙稀酰胺會(hui) 吸潮水解，這樣以來丙烯酸的含量就會(hui) 加大，從(cong) 而導致page膠不凝。
2、溫度。
溫度高時凝固快，但是亦不宜過高，因為(wei) 溫度變化會(hui) 影響交連物的孔徑大小。所以溫度在25度zui為(wei) 合適。
3、氧氣。
氧氣是凝固的終止劑，所以不能讓膠中出現氣泡。
雖然都是些看起來聽低級的錯誤，但是不注意還是會(hui) 犯。
31. 我做2維蛋白電泳，也有些心得：
1、向電泳玻璃板內(nei) 加入膠條時，先在縫隙中加入配好的溴芬蘭(lan) 緩衝(chong) 液，要加滿，再將膠條貼後麵玻璃板壁用薄塑料片將膠條緩緩推下至凝膠上緣，這樣可以很好的避免膠條下形成空氣泡。
2、能做出好的圖譜已經很不容易了，如果在掃圖時撕破實在可惜，所以掃圖要小心，將凝膠轉移到掃描儀(yi) 時可以用塑料隔片在下麵托著，同時保持有些水，這樣就安全多了。
32. 湊個(ge) 熱鬧說兩(liang) 句吧
1、sds-page膠如果配好裝好倒入內(nei) 槽液以後，發現內(nei) 槽液稍有滲漏，可以把外槽液多加一些，加滿，加到與(yu) 內(nei) 槽液相齊，這樣就可以繼續正常跑膠，不用浪費已經加進去的內(nei) 槽液
2、至於(yu) 染色脫色的問題，我們(men) 這裏一直是染色：加熱半分鍾，搖20分鍾；如果染液不是新配的，就加熱半分鍾搖十分鍾，涼透了再重複一次即可
脫色也一直是用去離子水煮兩(liang) 三次即可
3、不知道大家都是怎麽(me) 做酶切的，我的體(ti) 會(hui) 是，酶切質粒時，兩(liang) 個(ge) 酶分別單酶切比直接雙酶切效果要好很多。我有一次雙酶切兩(liang) 次都沒連出來，後來分步單酶切，連接效率幾乎100%。
可以*個(ge) 酶切完後直接把體(ti) 係熱失活，（根據酶說明書(shu) 上一般是65度20min）然後直接向裏麵補第二個(ge) 酶
或者*個(ge) 切完後用氯仿抽提，把蛋白提出
或者中間做一次回收，這個(ge) 就要考慮回收效率和損失的問題了，但是這樣除蛋白zui*
前兩(liang) 個(ge) 方法我們(men) 這都是有人做過的，已經都很好用了
33. 俺也來說說關(guan) 於(yu) Bradford法蛋白濃度定量和DTNB法巰基濃度定量的一點體(ti) 會(hui) ：
我是做蛋白修飾巰基後，通過這兩(liang) 種方法的定量來間接反應修飾的程度。一路摸索過來，也有半年有餘(yu) ；zui大的體(ti) 會(hui) 就是不要急於(yu) 求成，直接實驗，首先檢測修飾體(ti) 係是否對方法有影響，修飾基團是否會(hui) 在595nm和412nm下有特定的吸收，修飾後修飾試劑本身是否會(hui) 有變化，對蛋白整體(ti) 結構造成影響，其次再談具體(ti) 修飾比例和程度。對於(yu) 巰基濃度測定方法，有四種（Anal Biochem. 1998 Dec 1;265（1）:8-14），而DTNB本身雖然靈敏度不高，但是重複性和抗幹擾是*的了。
34. 考馬斯亮藍染色後的脫色，如在脫色液中加數張捏成條狀的Kimwipes紙（國外實驗室常用，相當我們(men) 的擦鏡紙，全棉纖維製造），由於(yu) 染料吸附到紙纖維上，脫色加速。待紙著色較深時，更換新紙條，不用換液。我想脫脂棉或紗布也是一樣的。但濾紙等可能不行，會(hui) 溶掉。
半貼壁細胞如SP/0或雜交瘤細胞傳(chuan) 代時，不用吹打或刮落。先將上清吸出，適當拍打培養(yang) 瓶（當然是塑料瓶，玻璃瓶拍碎了別找我），即可見貼壁細胞脫落，加培養(yang) 基混懸即可。注意，過力拍打培養(yang) 瓶會(hui) 裂，特別是瓶頸。
35. 一向電泳時，鹽離子容易聚在 膠槽的兩(liang) 側(ce) ．剪一小段ＩＰＧ膠條放在兩(liang) 側(ce) ，構成鹽橋，電壓就容易上去了．避免一向電泳不好影響zui後實驗結果．
36. 我也推薦幾條：
1、關(guan) 於(yu) 20021108戰友的說法，我覺得我們(men) 製備好了一批感受態，馬上轉化一種已知質粒，與(yu) 此同時，取一點感受態接種到含抗性的固/液體(ti) 培養(yang) 基培養(yang) 來做對照。這樣第二天即可以知道這批感受態是否還有外源質粒，又可以知道這批感受態轉化效率的高低。如果合格，那以後就可以放心使用！因為(wei) 我也曾經遇到其實是因為(wei) 感受態不好而導致試驗不成功，但是當時不知道，結果費時費力。
2、做克隆挑斑時，我們(men) 可以在將沾有菌體(ti) 的牙簽丟(diu) 到試管前，在一塊相應抗性的平板上點一下，標注清楚，培養(yang) 時間稍長一點，待長成較大菌落後收取。以後需要哪一個(ge) 菌,就在平板上挑取。這樣既方便快捷，又可以保證菌的一致。
3、抽提質粒時，加入Sloution II和III後要求輕柔混勻。我個(ge) 人覺得不用這樣，隻要不是非常劇烈，可以快速混勻。尤其可以運用在一次抽提多管質粒的時候，這樣可以快速，而且效果一點也不差。
4、抽提質粒時，用無水乙醇沉澱的時間可以由實驗操作者來決(jue) 定，如果時間充裕可以30min，否則8-10min也可以。至於(yu) 溫度，個(ge) 人覺得-20度好於(yu) 常溫。如果加入可醋酸鈉，會(hui) 較容易形成鹽類雜質，所以時間短一些更好！
37. 首先聲明：實驗中的一些技巧要用在首先對基本的操作有深刻了解的基礎上，在力求省時、省力、節約成本等的同時，實驗的準確性是zui重要的。
對大多數做蛋白的戰友們(men) 來說，培養(yang) 細胞應該是不陌生的，我這裏談一個(ge) 培養(yang) 細胞的小技巧，大家知道，對於(yu) 一定的空間（如某種尺寸的細胞培養(yang) 瓶）來說，細胞數目太多或者太少都不利於(yu) 其生長，太多了就要消化，太少了要換一個(ge) 小點兒(er) 的培養(yang) 瓶，我的做法是：如果細胞數目太少，可以不必去找小一點兒(er) 的培養(yang) 瓶，可把原來的培養(yang) 瓶由原來的平放改為(wei) 豎著放，這樣底部的空間就小了，有利於(yu) 細胞的生長，當細胞數目增加到一定程度的時候還可以在平過來，避免了來回換培養(yang) 瓶而增加汙染的機會(hui) （對沒有小培養(yang) 瓶的更實用）。
38. 說說關(guan) 於(yu) SDS-PAGE的幾個(ge) 小經驗
1、做好膠後，把所有的加樣孔都加上樣，這樣可以防止邊緣的樣品脫尾。
2、高電壓/高電流電泳時，可以把電泳槽放到4度冰箱中進行電泳，省時省力，1hr搞定。
3、膠考染時間40min，放在凝膠搖床上（沒有膠床可以放到28度普通搖床上，但要控製好搖床速度）緩緩搖動，使染色均勻，同時可提高檢測的靈敏度，根據我的經驗可以達到銀染的級別，就是脫色時間比較長，一般需要脫色2－3d，夏天的時候要勤換脫色液，防止變臭哦
39. 質粒小提如果是用作鑒定或酶切，不必進行酚仿抽提，將溶液1.2.3 離心後的清液移入一個(ge) 新的1.5ml離心管中，再次離心3-5分鍾，小心取出上清液後，直接沉澱，不必擔心DNA切不開，我已經這樣使用一年多，沒出過什麽(me) 問題。當然這樣的質粒不很幹淨，但是做鑒定足夠了。尤其是實驗室女同胞們(men) ，可以減少酚仿的侵害，而且節省時間。
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