新城疫間接ELISA抗體檢測試劑盒的研究介紹

       利用新城疫弱毒Clone30株病毒抗原．通過間接ELISA方法對試劑盒的各項反應條件進行係列的摸索試驗後，成功地組裝了檢測試劑盒。 對ELISA各項反應條件進行摸索，並確定了zui適工作條件，研究結果表明，新城疫病毒抗原*包被濃度為(wei) 1.086ug／ml，zui適包被條件為(wei) 4℃過夜，被檢血清*稀釋度為(wei) 1∶100，酶標結合物*工作濃度1∶800。待檢血清和酶標二抗的反應時間均為(wei) 37℃ 30分鍾，底物的反應時間為(wei) 37℃ 15分鍾。采用已確立的ELISA反應條件，檢測14份經西班牙海博萊公司的NDV-ky体育在线登陆檢測為(wei) 陰性的血清，依據陰陽性臨(lin) 界值=陰性血清OD平均值+3SD，確定陰陽性臨(lin) 界值為(wei) 0.34。用Lasota株全病毒進行阻斷試驗結果表明，Lasota株病毒能夠阻斷陽性血清與(yu) 包被的Clone30株病毒的結合反應。用此方法檢測E.coli的O_1、O_2、O_（78），AI H_9，EDS_（76），IBD的單因子雞血清，均為(wei) 陰性，無交叉反應，說明建立的ELISA具有很好的特異性。用已建立的ELISA和西班牙海博萊公司的NDV-ky体育在线登陆同時對64份血清樣本進行檢測，檢測結果表明，建立的ELISA方法的特異性和敏感性分別為(wei) 90％和93.2％。同時，用已建立的ELISA方法與(yu) HI方法對80份血清樣本進行檢測，結果表明ELISA的效價(jia) 對數與(yu) HI效價(jia) 對數呈線性回歸關(guan) 係，二者的相關(guan) 係數（r）為(wei) 0.91。試劑盒的保存期試驗結果表明，試劑盒可以保存到三個(ge) 月。 本研究建立了一種經濟、快速、準確的檢測方法，為(wei) 我國進行ND的血清學檢測和流行病學調查提供了良好的技術手段，為(wei) 該試劑盒的進一步開發和商品化奠定了較好的基礎。