感受態細胞的電轉化過程

        zui近，ky体育亚洲杯在進行了一項大腸杆菌電轉化感受態細胞的實驗。實驗過程操作規範順利，得出的結果良好。

實驗所需試劑：國產(chan) 細胞菌株、培養(yang) 基、10%甘油、DNA細胞

*天：
1. 將適合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置於(yu) LB或其他營養(yang) 豐(feng) 富的培養(yang) 基上，在37°C下過夜培養(yang)
2. 高溫滅菌大的離心瓶（250-500ml）以備第二天搖瓶用
3. 準備幾瓶滅菌水（總量約1.5升），保存於(yu) 冷凍室中以備第二天重懸浮細胞用

第二天：
4. 轉移0.2-1ml過夜培養(yang) 物至裝有500ml LB（或其他營養(yang) 豐(feng) 富的培養(yang) 基）的1-2升擋板搖瓶中
5. 37°C下劇烈振蕩培養(yang) 2-6小時
6. 定時監控O.D.600值（培養(yang) 1小時後每半小時測定一次）
7. 當O.D.600值達到0.5-1.0時，從(cong) 搖床中取出搖瓶，置於(yu) 冰上冷卻至少15分鍾（需要的話這種方式可以存放培養(yang) 液數小時）
8. 細胞在4°C 5000g下離心15分鍾，棄上清液（如需要，沉澱可在4°C的10%甘油中保存一兩(liang) 天）
9. 用滅菌的冰水重懸浮細胞。先用渦旋儀(yi) 或吸液管重懸浮細胞於(yu) 少量體(ti) 積中（幾毫升），然後加水稀釋至離心管的2/3體(ti) 積。
10. 照上麵步驟重複離心，小心棄去上清液
11. 照上麵步驟用滅菌的冰水重懸浮細胞
12. 離心，棄上清液
13. 用20ml滅菌的、冰冷後的10%甘油重懸浮細胞 14. 照上麵步驟離心，小心棄去上清液（沉澱可能會(hui) 很鬆散）
15. 用10%甘油重懸浮細胞至zui終體(ti) 積為(wei) 2-3ml
16. 將細胞按150μl等份裝入微量離心管，於(yu) -80°C保存

轉化方法:
1. 在冰上解凍電感受態細胞添加1-10μl DNA ，冰上培育約5分鍾
2. 添加1-3μl DNA ，冰上培育約5分鍾
3. 轉移DNA/細胞混合物至冷卻後的2mm電穿孔容器（無泡）中
4. 加載P1000，準備好300μl LB 或 2xYT
5. 對電穿孔容器進行脈衝(chong) （200 歐姆, 25μFd, 2.5 千伏）（檢查時間常數，應該在3以上）
6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至電穿孔容器中
7. 37°C下培養(yang) 細胞40分鍾至1小時以複原
8. 轉移細胞至適當的選擇培養(yang) 基上培養(yang)