ELISA的由來（酶聯免疫的由來）

酶聯免疫吸附試驗 （又稱酵素免疫分析法 ，Enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA ）利用 之間之特性，對檢體(ti) 進行檢測；由於(yu) 結合於(yu) 固體(ti) 承載物（一般為(wei) 塑膠孔盤）上之抗原或抗體(ti) 仍可具有 ，因此設計其鍵結機製後，配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗原或抗體(ti) 是否存在，並可利用呈色之深淺進行定量分析。 酶聯免疫吸附試驗 （又稱酵素免疫分析法 ，Enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA ）利用 之間之特性，對檢體(ti) 進行檢測；由於(yu) 結合於(yu) 固體(ti) 承載物（一般為(wei) 塑膠孔盤）上之抗原或抗體(ti) 仍可具有 ，因此設計其鍵結機製後，配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗原或抗體(ti) 是否存在，並可利用呈色之深淺進行定量分析。 根據待測樣品與(yu) 鍵結機製的不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（ sandwich ）、間接法（ indirect ）、以及競爭(zheng) 法（ Competitive ）三種為(wei) 主，以下為(wei) 各種方法之介紹。根據待測樣品與(yu) 鍵結機製的不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（ sandwich ）、間接法（ indirect ）、以及競爭(zheng) 法（ Competitive ）三種為(wei) 主，以下為(wei) 各種方法之介紹。

三明治法

三明治法常用於(yu) 檢測大分子抗原，一般之操作步驟為(wei) :三明治法常用於(yu) 檢測大分子抗原，一般之操作步驟為(wei) :

1. 將具有專一性之抗體固著（ coating ）於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著（ coating ）於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體
2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結
3. 洗去多餘待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結洗去多餘待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結
4. 洗去多餘未鍵結一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結洗去多餘未鍵結一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結
5. 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

三明治法分別以兩(liang) 種抗體(ti) 對檢體(ti) 中的抗原進行兩(liang) 次專(zhuan) 一性辨認，因此專(zhuan) 一性相當高，但此待測抗原必須是多價(jia) 抗原，如此才可獲得兩(liang) 種以上的專(zhuan) 一性抗體(ti) ，以分別進行夾心；而且此法需要足夠的空間以進行抗原抗體(ti) 的夾心，所以並不適用於(yu) 半抗原或小分子抗原等較小之標的。三明治法分別以兩(liang) 種抗體(ti) 對檢體(ti) 中的抗原進行兩(liang) 次專(zhuan) 一性辨認，因此專(zhuan) 一性相當高，但此待測抗原必須是多價(jia) 抗原，如此才可獲得兩(liang) 種以上的專(zhuan) 一性抗體(ti) ，以分別進行夾心；而且此法需要足夠的空間以進行抗原抗體(ti) 的夾心，所以並不適用於(yu) 半抗原或小分子抗原等較小之標的。

間接法

間接法常用於(yu) 檢測抗體(ti) ，一般之操作步驟為(wei) ：間接法常用於(yu) 檢測抗體(ti) ，一般之操作步驟為(wei) ：

1. 將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原
2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結
3. 洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結
4. 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，借儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。

競爭法

競爭(zheng) 法是一種較少用到的ELISA檢測機製，一般用於(yu) 檢測小分子抗原，其操作步驟為(wei) ：競爭(zheng) 法是一種較少用到的ELISA檢測機製，一般用於(yu) 檢測小分子抗原，其操作步驟為(wei) ：

1. 將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體
2. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結
3. 加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由於塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由於塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。
4. 洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

當需要偵(zhen) 測無法獲得兩(liang) 種以上單一性抗體(ti) 的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體(ti) 以固著於(yu) 孔盤上時，一般會(hui) 考慮使用競爭(zheng) 法ELISA。當需要偵(zhen) 測無法獲得兩(liang) 種以上單一性抗體(ti) 的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體(ti) 以固著於(yu) 孔盤上時，一般會(hui) 考慮使用競爭(zheng) 法ELISA。