免疫電泳磷酸鹽緩衝液 (pH8.6) 2025年藥典的正確使用方法

免疫電泳磷酸鹽緩衝(chong) 液 (pH8.6) 2025年藥典的正確使用方法

該緩衝(chong) 液在免疫電泳實驗中主要有兩(liang) 個(ge) 用途，使用方法有所不同：

用途一：作為(wei) 電泳槽緩衝(chong) 液

稀釋使用：藥典明確指出，用於(yu) 電泳槽的緩衝(chong) 液應是上述配製液的 10 倍稀釋液。

配製方法：取 1 份上述濃縮的緩衝(chong) 液母液，加入 9 份純化水，稀釋 10 倍，混勻。

例如：取 100 ml 母液，加入 900 ml 水，得到 1000 ml 的工作液。

注入電泳槽：將稀釋好的工作液倒入電泳槽的正、負兩(liang) 極槽中，液麵高度需符合電泳儀(yi) 的要求（通常需浸過電極）。

注意事項：

一致性原則：電泳槽左右兩(liang) 槽中的緩衝(chong) 液液麵應保持在同一水平，否則會(hui) 產(chan) 生虹吸現象，導致區帶歪斜。

重複使用：為(wei) 節省試劑，同一批緩衝(chong) 液可多次使用（通常 3-5 次）。但若發現緩衝(chong) 液 pH 值變化過大、離子強度改變（如因蒸發導致液麵下降）或明顯汙染，應立即更換新液。

用途二：作為(wei) 瓊脂糖凝膠的製備緩衝(chong) 液

直接使用：配製瓊脂糖凝膠時，應使用未經稀釋的上述緩衝(chong) 液母液。

例如：配製 1% 的凝膠，稱取 1 g 瓊脂糖，加入 100 ml 緩衝(chong) 液母液中。

加熱溶解：在微波爐或水浴中加熱，使瓊脂糖全溶解澄清，注意不要沸騰過度以免水分蒸發。

澆板：待凝膠冷卻至約 50-60°C（不燙手但尚未凝固時），將其澆注在水平放置的玻璃板或膠片上，插入合適的樣品梳，室溫下靜置凝固。

核心注意事項與(yu) 常見問題

pH 值的精確性：pH 8.6 是此方法的核心參數。pH 偏差會(hui) 直接影響蛋白質的帶電性質和遷移速率，導致電泳條帶扭曲、擴散或結果不可重複。每次使用前，尤其是重複使用的槽液，建議重新檢查 pH 值。

離子強度：緩衝(chong) 液的離子強度由配方中的鹽濃度決(jue) 定。離子強度過高會(hui) 產(chan) 生大量熱，可能導致蛋白變性；過低則會(hui) 導致電泳區帶擴散、條帶變寬。請嚴(yan) 格按照配方配製，不要隨意更改鹽的用量。

“搭橋"：在將凝膠板放入電泳槽時，需要用濾紙或紗布等“橋接"材料連接凝膠和槽中的緩衝(chong) 液。橋接物需全浸透，並與(yu) 凝膠接觸緊密，否則會(hui) 導致電流不均。

緩衝(chong) 液體(ti) 係一致：為(wei) 確保電場環境一致，凝膠中和電泳槽中必須使用相同離子成分和強度的緩衝(chong) 液。這就是為(wei) 什麽(me) 槽液是凝膠緩衝(chong) 液的 10 倍稀釋液的原因。絕對禁止在凝膠中使用一種緩衝(chong) 體(ti) 係，而在電泳槽中使用另一種。

安全操作：操作電泳儀(yi) 時，務必注意用電安全。在連接或取放凝膠時，確保電源是關(guan) 閉狀態。

總結

正確使用免疫電泳磷酸鹽緩衝(chong) 液 (pH 8.6) 的關(guan) 鍵可歸納為(wei) ：

精準配製：嚴(yan) 格按藥典配方稱量，最後務用 pH 計校準至 pH 8.6。

區分用途：

製膠用 -> 使用濃縮母液（未稀釋）。

電泳槽用 -> 使用10倍稀釋的工作液。

保持一致性：確保凝膠與(yu) 電泳槽緩衝(chong) 液體(ti) 係一致。

勤於(yu) 驗證：每次實驗前，檢查緩衝(chong) 液 pH 和狀態，及時更換不合格的緩衝(chong) 液。

遵循以上步驟，即可滿足2025版中國藥典對免疫電泳實驗的基本要求，為(wei) 獲得清晰、可靠的結果奠定基礎。

免疫電泳磷酸鹽緩衝(chong) 液 (pH8.6) 2025年藥典的正確使用方法