ELISA實驗樣品的收集、處理及保存方法
以下隻是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為(wei) 防腐劑。
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,將收集於血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然後1000×g離心20 分鍾,取上清即可,或將上清置於-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,並將標本在采集後的30分鍾內於2-8℃ 1000×g離心15分鍾,取上清即可檢測,或將上清置於-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鍾,取上清即可檢測,或將上清置於-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
4. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重後將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑)加入玻璃勻漿器中,於冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反複凍融。最後將勻漿液於5000×g離心5~10分鍾,取上清檢測。
注:標本溶血會影響最後檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
5. 保存:如果樣本收集後不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存於-20℃,避免反複凍融,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。