豬α幹擾素（IFN-α）ELISA檢測原理

豬α幹擾素（IFN-α）ELISA檢測原理

背景介紹：

α幹擾素是機體(ti) 免疫細胞產(chan) 生的一種細胞因子，是機體(ti) 受到病毒感染時，免疫細胞通過抗病毒應答反應而產(chan) 生的一組結構類似、功能接近的低分子糖蛋白。幹擾素在機體(ti) 的免疫係統中起著非常重要的作用，它有很多亞(ya) 型，其中最大的一類亞(ya) 型是α-幹擾素。各種配方的IFN-α已被開發為(wei) 治療幾種形式的癌症和病毒感染的藥物，但其主要用途是治療慢性丙型肝炎。

產(chan) 品名稱：豬α幹擾素（IFN-α）ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Porcine IFN-α ELISA Kit Instruction

貨號：XFP40219

規格：48T/96T

儲(chu) 存條件：2-8℃

有效期：6個(ge) 月

檢測原理：

試劑盒采用雙抗體(ti) 一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被豬α幹擾素（IFN-α）捕獲抗體(ti) 的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti) ，經過溫育並徹-底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬α幹擾素（IFN-α）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

以下隻是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為(wei) 防腐劑。

1.  血清：使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，將收集於(yu) 血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然後1000×g離心20 分鍾，取上清即可，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為(wei) 抗凝劑采集標本，並將標本在采集後的30分鍾內(nei) 於(yu) 2-8℃ 1000×g離心15分鍾，取上清即可檢測，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

3.  細胞培養(yang) 物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鍾，取上清即可檢測，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

4.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝(chong) 洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會(hui) 影響測量結果），稱重後將組織剪碎。將剪碎的組織與(yu) 對應體(ti) 積的PBS（一般按1:9的重量體(ti) 積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整，並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑）加入玻璃勻漿器中，於(yu) 冰上充分研磨。為(wei) 了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反複凍融。最後將勻漿液於(yu) 5000×g離心5~10分鍾，取上清檢測。

注：標本溶血會(hui) 影響最後檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

5.  保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於(yu) -20℃，避免反複凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意:

1. 嚴(yan) 格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用後立即冷藏保存試劑。所有液體(ti) 組分使用前充分搖勻。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸幹孔內(nei) 液體(ti) 。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板底殘留的液體(ti) 和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉汙染以免造成錯誤結果。

6. 在儲(chu) 存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體(ti) 。任何漂白成分都會(hui) 破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chan) 品。

10. 如果可能傳(chuan) 播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。