超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒的測定意義

超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒的測定意義(yi)

(測紅細胞)

一、測定意義(yi) ：

ATP 酶存在於(yu) 組織細胞及細胞器的膜上，是生物膜

上的一種蛋白酶，它在物質運送、能量轉換以及信息傳(chuan)

遞方麵具有重要的作用，機體(ti) 在缺氧及一些疾病狀態下，

此酶活力發生一係列改變。

二、測定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷，測定無機磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

三、試劑組成與(yu) 配製：（試劑盒有效期 6 個(ge) 月）

四、紅細胞的前處理：

1、紅細胞計數（見附錄）或血紅蛋白測定（試劑本所有售）。

2、紅細胞溶血液的製備：

a、壓積紅細胞溶血液的製備：取肝素抗凝全血，1000

轉/分，離心 10 分鍾，棄上層血清，留下層壓積紅

細胞，取一定量的壓積紅細胞，加 49 倍的雙蒸水，

例如取 5μL 的壓積紅細胞加入 245μL 雙蒸水中，混

勻，使其充分溶血，對光觀察直至溶液透亮。如果

預試結果太高，再將溶血液稀釋成不同濃度再進行

預試後，再決(jue) 定取樣濃度。

b、全血紅細胞溶血液的製備：取小鼠全血，輕輕搖勻，

取一定量的全血按照 1：

24 的體(ti) 積比加 24 倍雙蒸水，

製成 25 倍稀釋的溶血液，例如取 5μL 的全血加雙蒸

水 120μL 充分混勻，製成 25 倍稀釋的溶血液。對光

觀察直至溶液透亮。如果預試結果太高，再將溶血

液稀釋成不同濃度再進行預試後，再決(jue) 定取樣濃度。

[注 1]：製備好的溶血液盡快進行檢測，否則易失活，

因而必須在所有的準備工作做好以後再配製

溶血液。

[注 2]：用不完的抗凝全血 4℃可保存 2～3 天， -20℃

以下保存一周或者更長時間。

[注 3]：不可用磷酸鹽緩衝(chong) 液或含磷的試劑稀釋樣本。

[注 4]：預試結果將絕對吸光度值（測定管吸光度值—

對照管吸光度值）控製在 0.2 左右為(wei) 宜。

附錄Ⅰ：紅細胞計數法

紅細胞計數有以下三種方法，隻需取其中一種即可以。

1、計數板直接紅細胞計數：

①、紅細胞稀釋液的配製：檸檬酸三鈉 3.8 克，甲醛

1mL，雙蒸水 100mL，混勻，4℃保存。

②、取 1 支試管，加入紅細胞稀釋液 2mL，取抗凝全

血 10µl 加入試管稀釋液中，反複吹吸數次，

再將試管顛倒數次混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計數板。（應一次灌滿，而且

不要灌得太多。）

④、用高倍鏡計數左上、左下、右上、右下，中央 5

個(ge) 中方格的紅細胞數，將數得的數字×10 10，

即為(wei) 每升血中的紅細胞數。

2、光電比濁法計紅細胞數：

取試管 1 支，加入上述紅細胞稀釋液 4mL，再

取 20µl 抗凝全血，加入 4mL 稀釋液中，反複吹吸數

次，再將試管顛倒數次混勻，立即倒入比色杯中，

於(yu)  540nm，1cm 光徑，雙蒸水調零進行比色，記下

吸光度值。以計數板計數的紅細胞的數值為(wei) 橫坐標，

以相應管的吸光度值為(wei) 縱坐標，作標準曲線。您可

以不做曲線，用附錄Ⅱ參考標準曲線圖二（鼠紅細

胞數與(yu) 比濁法吸光度換算曲線）。根據標準曲線查出

紅細胞數。

3、用血紅蛋白（Hb）來換算紅細胞數：

取 10µl 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測試液

（本所有供應）中，混勻，靜置 10 分鍾，於(yu)  540nm，

1cm 光徑，雙蒸水調零進行比色。將測得的吸光度

乘以 367.7 即為(wei) 血紅蛋白的值。以計數板計數的紅細

胞的數值為(wei) 橫坐標，以相應管的血紅蛋白數為(wei) 縱坐

標，作標準曲線。您可以不做曲線，用附錄Ⅱ的參

考標準曲線圖一（鼠紅細胞數與(yu) 血紅蛋白數的換算

曲線）。根據標準曲線查出紅細胞數。

超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測試盒的測定意義(yi)