5´-核苷酸酶（5´-NT）的測定試劑盒的注意點

5´-核苷酸酶（5´-NT）的測定試劑盒的注意點

（比色法）

一、測定意義(yi) ：

5´-核苷酸酶（5´-NT）廣泛分布於(yu) 肝髒、膽道係統及各

種器官和組織中。血清中此酶活力增高（2～6）主要見於(yu) 膽

道係統疾病，如阻塞性黃疸，原發性及繼發性肝癌等，且通

常與(yu)  ALP 的活力變化相平行。其增高機理是因高濃度的膽

鹽促使 5´-NT 從(cong) 細胞膜上溶解出來，或膜通透性改變所致，

在骨骼係統的疾患如腫瘤轉移、畸形性骨炎、甲狀旁腺機能

亢進、佝僂(lou) 病等，ALP 活力通常增高，而 5´-NT 仍為(wei) 正常

或為(wei) 臨(lin) 界值。所以對 ALP 活力增高患者，測定此酶有助於(yu)

判斷 ALP 活力增高是膽道係統疾病還是骨骼係統疾病引

起。此外，妊娠婦女及兒(er) 童期 5´-NT 不增高，但 ALP 均升

高。

二、測定原理

5´-核苷酸酶（5´-NT）催化腺苷-5´-磷酸水解，生成腺

苷和無機磷。測定產(chan) 物無機磷的含量，代表 5´-NT 活力。可

以用抑製劑去除其他酶的影響。

三、試劑組成與(yu) 配製：（100T/48 樣）

試劑一：液體(ti)  80mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(ge) 月；過飽和溶液，

會(hui) 有針狀結晶析出，取上清使用。

試劑二：液體(ti)  12mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(ge) 月。

試劑三：液體(ti)  6mL×1 瓶。4℃冷藏 6 個(ge) 月。

試劑四：粉劑 2 支，稀釋液 6mL×2 支，4℃冷藏 1 年。臨(lin) 用

時將1支粉劑倒入1支稀釋液中，混勻溶解（現

用現配），配好後 4℃可保存二周。

試劑五：液體(ti)  60mL×2 瓶，該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上，4℃保存 1 年。

試劑六：液體(ti)  50mL×1 瓶，該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上，室溫或 4℃保存 1 年。

試劑七：粉劑×1瓶，

4℃保存1年；臨(lin) 用前每瓶加雙蒸水40mL

溶解，現用現配，配好後 4℃避光可保存一周；

試劑八：粉劑×1 瓶，4℃保存 1 年；每瓶加雙蒸水 50mL 溶

解，溶解後 4℃保存 3 個(ge) 月；

工作液一的配製：按試劑一：試劑二：試劑四=7:1:1 的比例

配製，現用現配。根據您的樣本數，放寬 1-2 個(ge)

樣本的量，需多少配多少。

工作液二的配製：按試劑一：試劑二：試劑三：試劑四=6:1:1:1

的比例配製，現用現配。根據您的樣本數，放寬

1-2 個(ge) 樣本的量，需多少配多少。

定磷劑的配製：按雙蒸水：試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1

比例，先後順序配製,現用現配,好後 4℃避光可保

存 48 小時。（配試劑所用器皿以及雙蒸水，一定

嚴(yan) 格防止磷汙染）

試劑九：6mmol/L 磷標準貯備液 5mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(ge) 月；

0.06mmol/L 磷標準應用液的配製：取 6mmol/L 磷標準貯備

液 0.05mL 用試劑五稀釋至 5mL 即（100 倍稀釋），

現用現配,配好後可保存 48 小時。

六、注意點：

1、血漿可能會(hui) 出現混濁，如有混濁可 3500 轉/分離心 10 分鍾

取上清進行檢測。與(yu) 金屬螯合的抗凝劑會(hui) 幹擾反應。肝素

抗凝不會(hui) 影響。

2、如樣本中酶活性偏低，可將酶促反應時間延長至 60 分鍾，

亦可（計算公式相應改變）。

3、所用器皿嚴(yan) 防磷汙染，測試所用試管要求嚴(yan) 格，要沒有一

點磷，若試管放過磷酸或磷酸鹽緩衝(chong) 液，一定要洗得非常

幹淨，要先用清潔劑加水煮，再用自來水衝(chong) ，最後用蒸餾

水衝(chong) 幹淨。最好用一次性塑料試管（本所有售），避免磷汙

染是檢測成敗的關(guan) 鍵。

附錄Ⅰ ：組織中 5´-NT 測定

一、樣本前處理：

準確稱取組織重量，按重量（g）:體(ti) 積（mL）=1:9

的比例，加入 9 倍體(ti) 積的生理鹽水，冰水浴條件機械勻漿，

2500 轉/分，離心 10 分鍾，取上清液進行測定。

[注]：不可用含磷的試劑作為(wei) 勻漿介質（例如 PBS），建

議用生理鹽水。

附錄Ⅱ：血清（漿）5'-NT 測定

一、樣本前處理：血清（漿）直接取樣進行檢測。

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