單擴散定量檢測板(IgG.IgM.IgA)的使用方法 您知道嗎
信帆生物供應 單擴散定量檢測板(IgG.IgM.IgA)，1套裏麵3種，分別檢測IgG.IgM.IgA。
1、血清免疫球蛋白的測定疫細胞血清免疫球蛋白（Ig）的測定是檢查體液免疫功能常用的方法。由於目前還沒有發現由IgD和IgE缺陷所致疾病，所以通常檢測IgG、IgM、IgA，這三類Ig就可以代表血清Ig的水平（表20-2）。檢測發現三類Ig水平均明顯低下，就可考慮體液免疫缺陷。但在分析兒童Ig水平時，應注意Ig的水平隨年齡而變化。
實驗概要可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉澱。基本類型有單向擴散和雙向擴散兩種。本文介紹了單向和雙向兩種瓊脂擴散試驗的操作流程。單向瓊脂擴散試驗主要用於檢查血清中各種免疫球蛋白和補體成份的含量；雙向瓊脂擴散試驗可用來分析和鑒定標本中多種抗原或抗體成份，並用以測定抗原或抗體的效價。實驗原理1. 單向瓊脂擴散試驗是一種定量試驗，將抗體混合於瓊脂內，傾注於玻片或平皿上，凝固後在瓊脂上打孔，再將抗原標本加入孔內，經過一定的時間，在孔的周圍出現抗原抗體複合物形成的沉澱環，環的大小與抗原含量和擴散時間相關。用不同濃度的抗原製成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從準標曲線中求出。2. 抗原和抗體加到瓊脂板上相對應的孔中，兩者各自向四周擴散，如兩者相對應，濃度比例合適，則經一定時間後，在抗原、抗體孔之間出現清晰致密的白色沉澱線。每一抗原與其相對應抗體隻能形成一條沉澱線，若同時含有若幹對抗原抗體係統，因其擴散速度的不同，可在瓊脂中出現多條沉澱線。且根據沉澱線融合情況，還可鑒定兩種抗原是相同還是部分相同。實驗步驟1. 單向瓊脂擴散試驗(Single immunodiffusion test)-人血清中IgG、IgA、IgM的測定 1) 材料IgG、IgA、IgM免疫板、參考血清、待檢血清、微量加樣器(10微升)、量尺、紗布、生理鹽水、帶蓋方盤。 2) 方法 a. 免疫瓊脂板製備：將1.5%瓊脂(用PH8.2、0.05M的巴比緩衝液配成)，加熱溶化，待瓊脂冷至56℃加入適量抗血清(抗血清最終稀釋度取決於抗血清所標化的稀釋度)，混勻，製成厚1.5mm的瓊脂板，待瓊脂凝固後打孔，孔徑為3mm，孔距1～1.2cm。 b. 稀釋參考血清及待檢血清：參考血清用0.5ml蒸餾水溶解後使用，參考血清、待檢血清稀釋按要求進行。 c. 加樣：將上述稀釋參考血清分別滴入相應的抗體免疫板的一排孔內，其餘孔滴加待檢的稀釋血清，每個檢樣加兩個孔，每孔滴加10微升。 d. 擴散：將免疫板置水平濕盤內，放進37℃溫箱，IgG免疫板擴散24小時，IgA、IgM板48小時後取出置黑色背景前觀察結果，(如果沉澱環不清晰，也可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小時後觀察)，必要時可以染色後觀察。 e. 繪製標準曲線及血清標本中IgG、IgA、IgM定量測定：測量沉澱環直徑。沉澱環直徑的大小除與抗原量相關，還與分子量和擴散時間有關。這種沉澱環直徑與抗原含量的關係不是直線相關，而是對數關係，這種關係有兩種計算方法： Mancini曲線－適用於大分子抗原和長時間擴散(＞48小時)的結果處理。使用方格計算紙劃線，沉澱環直徑的平方與抗原濃度呈線性關係。公式表示：C／d2 ＝K(C＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，K＝常數)。 Fehey曲線－適用於小分子抗原和較短時間(24小時)擴散的結果處理。使用半對數紙劃線，濃度的對數與沉澱環之間呈線性關係。公式表示：logC／d＝K(C＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，K＝常數)。2. 雙向瓊脂擴散試驗(Double immunodiffusion test) 1) 材料羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精製瓊脂粉，生理鹽水、載玻片，打孔器(直徑3mm)、濕盒、吸管等。 2) 方法 a. 用生理鹽水配製1.0～1.5%瓊脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取3.5ml趁熱澆於載玻片上，製成瓊脂板。 b. 待瓊脂凝固後，按右圖用打孔器打孔，並用針頭挑去孔中瓊脂(孔距為5mm)。 c. 在①孔中加正常人混合血清，在②孔中加小牛血清，③孔中加羊抗人全血清，注意不要溢出。 d. 將加好樣品的瓊脂板置於(yu) 濕盒內(nei) ，於(yu) 37℃溫箱內(nei) 放置24小時後觀察結果。
單擴散定量檢測板(IgG.IgM.IgA)的使用方法 您知道嗎
更新時間：2023-11-13 
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