western抗體孵育時間您知道嗎

western抗體(ti) 孵育時間您知道嗎

我們(men) 來看看不用的老師不同的意見：

老師一：

1. 首先建議仔細查看抗體(ti) 試劑的說明書(shu) ，全麵掌握孵育的時間和溫度等條件，考慮使用同一個(ge) 廠家的配套試劑。

2.每一種試劑作用之後的洗滌過程，都需要標準操作，用力過猛或時間過久可能導致假陰性反應，而洗滌時間過短、衝(chong) 洗不充分會(hui) 導致假陽性反應。

3.設置陽性對照，監控抗原抗體(ti) 反應和顯色的過程，以便分析結果和過程中可能存在的問題。

老師二：

一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果佳；孵育時間與(yu) 溫度、抗體(ti) 濃度有關(guan) ，一般37度1-2h，4度過夜（從(cong) 冰箱拿出後37度複溫45min）。具體(ti) 條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30min-1h，濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度。

孵育時間過長非特異性條帶顯現的可能增加

老師三：

一抗的孵育時間與(yu) 溫度、抗體(ti) 濃度有關(guan) 。一般情況下，在37℃的條件下，孵育1-2小時左右。在室溫的條件下，孵育3小時左右。在4℃的條件下，孵育18-24小時左右。如果一抗的濃度過高或者是孵育時間過長，會(hui) 導致非特異性吸附，增加洗滌的難度，最終因洗滌不徹而出現非特性顯色。

老師四：

western blot 一抗孵育時間過長當然有影響的，一抗孵育時間太長容易導致非特異性吸附加深

一般可以室溫孵育三十分，然後四度過夜。或者選擇室溫孵育2小時直接二抗。因為(wei) 洗膜洗去的是未結合的抗體(ti) ，抗體(ti) 結合上就不容易洗掉了。洗膜不背景會(hui) 深，但洗膜時間延長並不能去除背景。