ELISA實驗中細胞樣本的收集和處理方法

ELISA實驗中細胞樣本的收集和處理方法

細胞上清

需保證各組間培養(yang) 細胞的數量基本一致，細胞生長狀態良好。建議采用6孔板培養(yang) 細胞，並保證細胞數量達到106左右，即細胞密度達70%-80%左右，即可收集培養(yang) 液，於(yu) 2-8℃、1000×g離心20分鍾，除去雜質及細胞碎片，取上清檢測。

細胞裂解液

貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗，然後用胰蛋白酶消化，1000×g離心5分鍾後收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每106個(ge) 細胞中加入150-200μL PBS重懸（推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑；若含量很低，可減少PBS的體(ti) 積），並通過反複凍融或超聲，使細胞破碎。將提取液於(yu) 2-8℃、1500×g離心10分鍾，取上清檢測。

■ 反複凍融：-80℃放置1h/液氮放置0.5h，然後置於(yu) 30℃水浴鍋中，輕微振蕩，使其迅速融化，此操作反複2-3次即可。

■ 超聲方法：用超聲波發生器，以振幅14μm超聲處理30 s，在冰水浴條件下，破碎細胞；或者使用超聲波破碎儀(yi) ，200 W，2 s/次，間隙3 s，總時間5 min。

樣本中建議提前加入蛋白酶抑製劑，常規推薦PMSF：工作濃度:17~174μg/mL(0.1~1mM)。

細胞培養(yang) 過程中，有許多條件需要摸索，包括細胞類型、培養(yang) 基組分、細胞數量、生產(chan) 狀態、幹預條件和物質等。前期基礎打得牢固，對後續ELISA或其他種類實驗的開展，及結果的分析，具有更多的參考意義(yi) 。

ELISA實驗中細胞樣本的收集和處理方法