層析柱裝填方法您知道嗎？

層析柱裝填方法您知道嗎？

1. 填裝之前，檢查層析柱各接頭、部件不能有破損漏氣，並將層析柱清洗幹淨，壁上不要有殘留小顆粒，會(hui) 影響層析效果；

2. 確保填料、層析柱、所有的緩衝(chong) 液以及樣品溫度一致，溫度不一致容易導致產(chan) 生氣泡。

3. 所有過柱子的液體(ti) （包括水、平衡緩衝(chong) 液、洗脫緩衝(chong) 液、再生溶液）用0.45um濾膜抽濾，並進行超聲脫氣，注意填料不可超聲脫氣；

4. 將填料用純水清洗幾遍，洗掉保存液，並將上層的細小顆粒棄去；

5. 關(guan) 閉層析柱出水口，玻璃棒引流往層析柱內(nei) 倒入約1/4柱體(ti) 積的水（或緩衝(chong) 液），務必使底端無氣泡；

6. 將填料用玻璃棒攪勻成懸漿，用玻璃棒引流，均勻的一次性倒入柱子內(nei) ，注意務必不要產(chan) 生氣泡，待柱子內(nei) 填料穩定，打開出液管，使凝膠在柱內(nei) 自由沉降。

7. 如果是手動操作，將柱子用純水衝(chong) 幾個(ge) 柱體(ti) 積，使柱床穩定；

如果儀(yi) 器操作，用逐漸加大流速的方法，將填料壓實，注意：既不能過鬆，也不能過緊，要注意不能超過填料的最大耐壓。

8. 上樣前，樣品要進行離心或者用0.45um濾膜過濾；

注意：

1. 始終保持柱內(nei) 液麵高於(yu) 凝膠表麵，否則水分蒸發，凝膠變幹，影響填料的純化效果，有轉換接頭的柱子，需要保證進出液管密封；

2. 防止液體(ti) 流幹，使柱內(nei) 混入大量氣泡，影響純化效果；

3. 切莫超過填料的最大耐壓，以免對填料造成不可逆的損壞；

4. 注意不要超過層析柱的最大耐壓，超過最大耐壓可能會(hui) 漏液，甚至衝(chong) 掉柱頭；

5. 凝膠一般都比較昂貴，需小心操作，實驗後回收，盡量避免汙染、浪費和損失。

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