鏈球菌G蛋白瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用注意事項

鏈球菌G蛋白瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用注意事項

鏈球菌G蛋白（Streptococcus Protein G 簡稱SPG）是G、C型鏈球菌細胞壁中的一種蛋白質，能特異性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段結合而不影響其Fab段與(yu) 抗原分子結合的能力，其親(qin) 和填料可以用於(yu) 從(cong) 血清、腹水、組織培養(yang) 物等上清中結合吸附並純化免疫球蛋白（抗體(ti) ）。

技術指標：

抗體(ti) 與(yu) 蛋白A、蛋白G的結合力：

注：-表示不結合；+表示微弱結合；++表示中等結合；+++表示很強結合。

應用舉(ju) 例：

結合緩衝(chong) 液：20 mM磷酸鹽緩衝(chong) 液（PB），pH 7.4

洗脫緩衝(chong) 液：0.1 M甘氨酸-鹽酸緩衝(chong) 液，pH 2.7

中和緩衝(chong) 液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重組蛋白G瓊脂糖凝膠預填柱，用5 ~ 10個(ge) 柱床體(ti) 積的蒸餾水洗去保存液；

2)用結合緩衝(chong) 液平衡 5 ~ 10個(ge) 柱床體(ti) 積；

3)將5 ml兔多抗血清用結合緩衝(chong) 液稀釋至50 ml，0.45 μm濾膜過濾上樣；

4)用結合緩衝(chong) 液平衡 5 ~ 10個(ge) 柱床體(ti) 積至基線；

5)用洗脫緩衝(chong) 液洗脫抗體(ti) ，收集洗脫峰，並用中和緩衝(chong) 液調節其pH至中性；

6)每次使用後再用3 ~ 5個(ge) 柱床體(ti) 積的洗脫緩衝(chong) 液再生清洗；

7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。

圖 1

注意事項：

1)預填柱使用簡易方便，在沒有儀(yi) 器設備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫後一般pH很低，應立即用堿性中和緩衝(chong) 液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 將收集到的抗體(ti) 溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩衝(chong) 液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩衝(chong) 液），以利於(yu) 維持抗體(ti) 的生物活性，避免抗體(ti) 失活。

3)使用時保證柱子和緩衝(chong) 液的溫度一致，避免柱床內(nei) 產(chan) 生氣泡，影響純化效果，如果已經產(chan) 生氣泡，可以自行重裝柱子。

4)通常目標樣品洗脫後應繼續用0.1 M甘氨酸-鹽酸緩衝(chong) 液（pH 2.0 ~ 2.7）洗3 ~ 5個(ge) 柱體(ti) 積，然後用平衡緩衝(chong) 液清洗5個(ge) 柱體(ti) 積以上，作簡易再生。

5)使用數次後應進行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個(ge) 柱體(ti) 積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩衝(chong) 液清洗5個(ge) 柱體(ti) 積以上；或70%乙醇洗5個(ge) 柱體(ti) 積以上（可保持4 ~ 6 h），再用平衡緩衝(chong) 液清洗5柱體(ti) 積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質和脂類，恢複柱子的載量和流速。

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