Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用說明

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用說明

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF（Strep-Tactin Berpharose FF）

1.      產(chan) 品介紹

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親(qin) 和層析分離介質，主要用於(yu) 純化Strep II標簽蛋白。Strep II標簽為(wei) 8個(ge) 氨基酸的小標簽（WSHPQFEK），由於(yu) 標簽小，僅(jin) 為(wei) 1kDa左右，一般不影響融合後蛋白質的結構和功能，常用於(yu) 融合表達蛋白質的檢測和純化。

本產(chan) 品的配基Strep-Tactin是鏈黴親(qin) 和素（Streptavidin）的突變體(ti) ，與(yu) 鏈黴親(qin) 和素相比，Strep-Tactin對Strep II標簽的親(qin) 和能力至少強10倍以上，能夠在溫和的條件下與(yu) Strep II融合蛋白結合和解離。由於(yu) Strep-Tacin對Strep II標簽具有高度特異性，一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質樣品。

Strep II標簽蛋白與(yu) 凝膠結合後可使用脫硫生物素競爭(zheng) 方式進行洗脫，該洗脫方式比較溫和，一般不會(hui) 影響蛋白質的性質。如蛋白質能耐受一定的堿，也可用堿液洗脫，比如10mM NaOH等。Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿清洗，可以用0.5M NaOH進行再生清洗和去除熱源等。另外，2-(4-羥基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用於(yu) 凝膠再生，過量的HABA能夠競爭(zheng) 下脫硫生物素，並且在無HABA的緩衝(chong) 液中，能將凝膠上的HABA洗脫。

2.規格

1ml（預裝柱）、5ml（預裝柱）、10ml（預裝柱）、20ml、100ml、500ml

3.產(chan) 品性能

4.純化流程

①推薦緩衝(chong) 液

純化Strep II標簽蛋白

結合緩衝(chong) 液：100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0；

或20mM NaH2PO4，280mM NaCl，6mM KCl，pH7.4

洗脫緩衝(chong) 液：結合緩衝(chong) 液+ 2.5mM脫硫生物素；

或10mM NaOH

再生緩衝(chong) 液：0.5M NaOH；

或結合緩衝(chong) 液+1mM HABA

②樣品準備

上柱的樣品應盡量保持與(yu) 結合緩衝(chong) 液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處

理樣品。並且上柱前應過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。

③樣品純化

（1）平衡：取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中，用蒸餾

水清洗5個(ge) 柱體(ti) 積去除保存液，再用結合緩衝(chong) 液平衡5個(ge) 柱體(ti) 積，建議流速為(wei) 100cm/h。

（2）上樣：將準備好的樣品上柱，建議流速為(wei) 20-100cm/h，可根據實際結合情

況選擇流速，能獲得較好的效果。

（3）再平衡：上樣後用結合緩衝(chong) 液平衡10個(ge) 柱體(ti) 積以上，或平衡至基線，洗去

雜質，推薦流速為(wei) 100cm/h。

（4）洗脫：用洗脫緩衝(chong) 液洗10-20個(ge) 柱體(ti) 積，建議流速為(wei) 100cm/h，收集的洗脫

液應立即調節pH至穩定範圍，並根據需要置換緩衝(chong) 液。

（5）NaOH再生：洗脫目的蛋白後的柱子用蒸餾水清洗3-5個(ge) 柱體(ti) 積，並用0.5M

NaOH再生3-5個(ge) 柱體(ti) 積，再用蒸餾水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或進行下

一次純化。

（6）HABA再生：用脫硫生物素洗脫目的蛋白的，還可以用HABA緩衝(chong) 液再生，

一般用HABA的結合緩衝(chong) 液洗15個(ge) 柱體(ti) 積，再用結合緩衝(chong) 液洗30個(ge) 柱體(ti) 積，然後可

以用20%乙醇保存柱子，或進行下一步純化。HABA上柱後凝膠顏色會(hui) 變為(wei) 紅橙色，

在結合緩衝(chong) 液平衡後會(hui) 恢複正常的白色，這種再生方式一般使用體(ti) 積會(hui) 大些。

5.注意事項：

1)使用時保證柱子和緩衝(chong) 液的溫度一致，避免柱床內(nei) 產(chan) 生氣泡，影響純化效果。

2)本產(chan) 品保存條件為(wei) 20%乙醇，4~8℃。

3) 2-25℃,常壓,避光運輸

4）僅(jin) 供科研實驗使用

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用說明