脾髒淋巴細胞分離試劑盒的操作說明

脾髒淋巴細胞分離試劑盒的操作說明

規格：200 mL/kit

保存：本產(chan) 品對光敏感，應該室溫避光儲(chu) 存，保質期2 年。無菌開封後，保存於(yu) 室溫。

試劑盒組成：

各種動物脾髒淋巴細胞分離液 200mL

全血及組織稀釋液 200mL

細胞洗滌液 200mL

淋巴細胞分離方法（僅(jin) 供參考）

1. 製備脾髒的單細胞懸液。

2. 取一支適當的離心管，加入與(yu) 脾髒單細胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少於(yu) 3 mL，總體(ti)

積不能超過離心管的三分之二，否則會(hui) 影響分離效果）。

3. 小心吸取單細胞懸液加於(yu) 分離液液麵上，注意保持兩(liang) 液麵界麵清晰。（可以使用巴氏德吸管吸

取單細胞懸液，然後小心的平鋪於(yu) 分離液上，因為(wei) 兩(liang) 者的密度差異，將形成明顯的分層界麵。）

4. 室溫，水平轉子500~900g，離心20~30min。（根據脾髒單細胞懸液的量確定離心條件，單細胞

懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體(ti) 離心條件可以自

行摸索，以達到最佳分離效果）。

5. 離心後，此時離心管中由上至下細胞分四層。第一層為(wei) 稀釋

液層；第二層為(wei) 環狀乳白色淋巴細胞層；第三層為(wei) 透明分離液

層；第四層為(wei) 紅細胞層。

6. 用吸管小心吸取第二層環狀乳白色淋巴細胞至另一潔淨的

15mL離心管中，向離心管中加入10ml細胞洗滌液洗滌白膜層細

胞，250g，離心10min。

7. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心

10min。

8. 重複步驟7

9. 棄上清，細胞重懸備用。

脾髒單細胞懸液的製備方法（僅(jin) 供參考）

脾髒研磨的方法：

1. 無菌條件下摘取脾髒，撕去脾髒被膜，用眼科剪將脾髒剪成小塊。

2. 將尼龍篩網或者是細胞過濾篩放置於(yu) 平皿上，加入少量全血及組織稀釋液（保證脾髒及獲得的

細胞處於(yu) 液體(ti) 環境中）。

3. 將脾髒放置於(yu) 篩網上，使用注射器活塞或者是無菌鑷子來研磨脾髒（盡量控製研磨力度，保持

篩網懸空，避免在皿底上直接研磨而造成大批細胞死亡）

4. 研磨後使用全血及組織稀釋液衝(chong) 洗篩網，收集細胞懸液，再經濾網過濾。

注：

分層示意圖

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A. 可用酶消化法，使用膠原酶對脾髒組織進行消化，得到單細胞懸液。

B. 如果最終得到的細胞需要培養(yang) ，那全過程所需試劑與(yu) 器材均要求無菌。

C. 根據脾髒的體(ti) 積控製單細胞懸液的濃度在108~109個(ge) /mL。

注意事項：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為(wei) 無菌產(chan) 品，為(wei) 延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免

微生物汙染。

B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nei) 溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是

溫度較低的條件下離心，可能會(hui) 導致白膜層中紅細胞汙染加重。

C. 待分離的組織要求新鮮，避免冷凍和冷藏。

D. 部分塑料製品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(hui) 導致細胞掛壁，影響分離效果。

E. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yang) ，那在製備單細胞懸液和分離過程中，注意無菌操作，避

免微生物汙染。

脾髒淋巴細胞分離試劑盒的操作說明