組織自發熒光淬滅劑應該如何正確使用

組織自發熒光淬滅劑應該如何正確使用

描述：

許多組織會(hui) 產(chan) 生可透過各種波長濾光片的內(nei) 源性自發熒光，顯著幹擾抗體(ti) 標記熒光觀察甚至導致免疫組化染色失敗。自發熒光淬滅試劑中的離子可通過碰撞方式捕獲自發熒光光源分子發出的電子，阻止該電子從(cong) 激發態回歸基態和能量釋放，從(cong) 而淬滅自發熒光。采用優(you) 化的孵育時間，可以最大限度地消除自發熒光而不明顯影響抗體(ti) 標記的熒光。

適用：

各種組織、細胞免疫熒光染色的自發熒光消除。特別適用於(yu) 神經組織自發熒光淬滅。

儲(chu) 存：

4 ºC避光。

以下步驟在免疫熒光組化染色完畢之後(而非在熒光染色完畢之前)執行。對特定的組織和細胞類型，必需優(you) 化孵育時間以便最大限度淬滅自發熒光而不明顯影響抗體(ti) 標記的熒光(步驟2)。請仔細閱讀後麵的說明。

1. 不同物種不同類型組織的自發熒光具有不同的特征，使用組織自發熒光淬滅劑的效果可能會(hui) 有差別。另外，任何針對自發熒光的淬滅，將會(hui) 在一定程度上降低抗體(ti) 熒光強度。所幸的是該試劑對自發熒光的淬滅程度遠遠超出抗體(ti) 熒光強度的降低，因而能在二者之間獲得較好的平衡。由於(yu) 不很清楚的原因，本試劑對於(yu) 消除腦脊髓神經組織的自發熒光具有更好的效果。

2. 為(wei) 獲得最佳效果，必需優(you) 化孵育時間以便最大限度淬滅某一特定組織的自發熒光而不明顯影響抗體(ti) 標記的熒光(步驟2)。重要的標本應在確定最佳孵育時間之後使用本試劑。進行優(you) 化時，可取數張組織切片或位於(yu) 培養(yang) 皿中的細胞，在免疫熒光組化染色完畢之後加入組織自發熒光淬滅劑，孵育5、10、30、60、90分鍾等不同時間，衝(chong) 洗後觀察熒光。如果組織自發熒光仍然很強，可延長孵育時間；如果孵育時間小於(yu) 10分鍾而熒光消退十分明顯，可將孵育時間減少為(wei) 1-5分鍾，或者取少量的組織自發熒光淬滅劑加等份的雙蒸水稀釋，然後孵育10-90分鍾進行優(you) 化。

3. 組織自發熒光淬滅劑必須在完成免疫熒光組化染色後使用，否則將嚴(yan) 重降低抗體(ti) 熒光。

組織自發熒光淬滅劑應該如何正確使用