ELISA實驗中假陽性產生的原因你清楚嗎？

ELISA實驗中假陽性產(chan) 生的原因你清楚嗎？

假陽性本底產(chan) 生的原因

1 、抗原因素

融合蛋白對基因工程抗原特異性的影響。以丙肝診斷試劑盒為(wei) 例為(wei) 例，因為(wei) 包被的基

因工程抗原為(wei) 融合蛋白，包含了來自表達載體(ti) 的一些序列，因此可以與(yu) 血清中抗大腸杆

菌的因子發生反應而產(chan) 生了可疑標本。

錯誤排序的影響。合成肽在製備過程中，如果某些肽序列錯誤，會(hui) 導致合成肽特異性

改變而產(chan) 生假陽性。另外，在構建基因工程表達載體(ti) 時引入的HCV 核苷酸發生相位改變或

點突變也會(hui) 對抗原的特異性產(chan) 生不利的影響，但由於(yu) 基因工程技術的不斷進步，由工藝原因

造成的抗原特異性降低會(hui) 逐漸被克服。

 抗原純度對特異性的影響。以HCV 抗原為(wei) 例，利用大腸杆菌大規模表達後需經破碎

細胞、鹽析、粒子交換柱等分離純化步驟才能最後的到一定純度的HCV 抗原。目前的

工藝還不能做到抗原純度為(wei) 100％，因此抗原中還混有大腸杆菌的其它雜蛋白，受過大

腸杆菌感染的人，血清中的抗大腸杆菌抗體(ti) 可和這些雜蛋白產(chan) 生反應而引起假陽性。

2 科研血清中的正常IgG

科研血清中IgG 的濃度對HCV 試劑盒有較大的影響。HCV 試劑盒采用的間接法，酶標抗

抗體(ti) 能與(yu) 人所有IgG 結合，而IgG 吸附於(yu) 板孔的能力很強，因此我們(men) 采用100 微升樣稀加

10 微升血清來將其稀釋以降低本底。到成人時，據統計學調查，成人的IgG 為(wei) 12mg/ml，

而有些人的IgG 濃度會(hui) 遠遠高於(yu) 此，這部分人的血清經ELISA 反應後往往會(hui) 顯色。

人血情中異常的IgG

結締組織病（係統性紅斑狼瘡、多發性骨髓瘤等）等病症時，血清中的風濕小體(ti) 和其它

異常IgG（IgG 濃度達到50mg/ml）會(hui) 引起本底升高或假陽性。

溶血的影響

當溶血時，紅細胞中的血紅蛋白釋放到血清中，血紅蛋白具有過氧化物酶的性質，當其通

過吸附或“PP 效應"（蛋白質間相互吸附的現象）結合後，可催化A、B 液顯色而造成假陽

性。

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