巴比B 妥電泳緩衝液配置簡單介紹

巴比B 妥電泳緩衝(chong) 液配置簡單介紹 

0.05moI/L pH8.6 BBT緩衝(chong) 液

BBT 1.84g

加蒸餾水 200ml 加熱溶解 BBT納 10.3g

疊氮納 0.2g

加蒸餾水溶解 , 並補加到 1000ml 。

B比 妥緩衝(chong) 液(pH8.6)：　取BBT5.52g與(yu) BBT鈉30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。

BBT－氯化鈉緩衝(chong) 液(pH7.8)：　取BBT鈉5.05g,加氯化鈉3.7g及水適量使溶解，另取明膠0.5g加水適量，加熱溶解後並入上述溶液中。然後用0.2mol/L鹽酸溶液調節pH值至7.8，再用水稀釋至500ml，即得。

 BBT電泳緩衝(chong) 液（pH8.6）如何正確使用

醋酸纖維素薄膜電泳實驗操作注意事項：

1.首先,裁剪適量尺寸濾紙條來搭建濾紙橋,再將緩衝(chong) 液倒入電泳槽,在醋酸纖維素薄膜無光澤麵做好點樣標記。
2.然後,將該麵在下浸入緩衝(chong) 液約二十分鍾,在浸透*以後,取出吸取多餘(yu) 緩衝(chong) 液的備用。
3.然後,用加樣器取適量蛋白樣品均勻加於(yu) 點樣線處,最終形成一定寬度、粗細均勻的直線。
4.然後,將點樣端位於(yu) 負極,無光澤麵朝下,平整放於(yu) 濾紙橋上,平衡完畢後,調節電壓並開始電泳。

其他注意事項：

1、醋酸纖維素薄膜的預處理
　　市售醋酸纖維素薄膜均為(wei) 幹膜片，薄膜的浸潤與(yu) 選膜是電泳成敗的重要關(guan) 鍵之一。將幹膜片漂浮於(yu) 電極緩衝(chong) 液表麵，其目的是選擇膜片厚薄及均勻度，如漂浮15s—30s時，膜片吸水不均勻，則有白斑點或條紋，這提示膜片厚薄不勻，應舍去不用，以免造成電泳後區帶扭曲，界線不清，背景脫色困難，結果難以重複。由於(yu) 醋酸纖維薄膜親(qin) 水性比紙小，浸泡30min以上是保證膜片上有一定量的緩衝(chong) 液，並使其恢複到原來多孔的網狀結構。最好是讓漂浮於(yu) 緩衝(chong) 液的薄膜吸滿緩衝(chong) 液後自然下沉，這樣可將膜片上聚集的小氣泡趕著走。點樣時，應將膜片表麵多餘(yu) 的緩衝(chong) 液用濾紙吸去，以免緩衝(chong) 液太多引起樣品擴散。但也不能吸得太幹，太幹則樣品不易進入薄膜的網孔內(nei) ，而造成電泳起始點參差不齊，影響分離效果。吸水量以不幹不濕為(wei) 宜。為(wei) 防止指紋感染，取膜時，應戴指套或用鑷子。
　　
2、緩衝(chong) 液的選擇 　　
醋酸纖維素薄膜電泳常選用 BBT電泳緩衝(chong) 液（pH8.6），其濃度為(wei) 0.05mol/L—0.09mol/L。選擇何種濃度與(yu) 樣品及薄膜的薄厚有關(guan) 。選擇時，先初步定下某一濃度，如電泳槽兩(liang) 極之間的膜長度為(wei) 8 cm—10cm，則需電壓25V/cm膜長，電流強度為(wei) 0.4mA/cm—0.5mA/cm膜寬。當電泳達不到或超過這個(ge) 值時，則應增加緩衝(chong) 液濃度或進行稀釋。緩衝(chong) 液濃度過低，則區帶泳動速度快，並由於(yu) 擴散變寬；緩衝(chong) 液濃度過高，則區帶泳動速度慢，區帶分布過於(yu) 集中不易分辨。 　
　
3、加樣量
　　加樣品的多少與(yu) 電泳條件、樣品的性質、染色方法與(yu) 檢測手段靈敏度密切相關(guan) 。作為(wei) 一般原則，檢測方法越靈敏，加樣量則越少，對分離更有利。如加樣量過大，則電泳後區帶分離不清楚，甚至互相幹擾，染色也較費時。如電泳後用洗脫法定量時，每厘米加樣線上需加樣品0.1μl—0.5μl約相當於(yu) 5μg—1000μg蛋白。血清蛋白常規電泳分離時，每厘米加樣線加樣量不超過1μl，相當於(yu) 60μg—80μg的蛋白質。但糖蛋白和脂蛋白電泳時，加樣量則應多些。對每種樣品加樣量均應先作預實驗加以選擇。
　　點樣好壞是獲得理想圖譜的重要環節之一，以印章法加樣時，動作應輕、穩，用力不能太重，以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區帶分離效果。 　　
4、電量的選擇
　　電泳過程應選擇合適的電流強度，一般電流強度為(wei) 0.4mA/cm—0.5mA/cm寬膜為(wei) 宜。電流強度高，尤其在溫度較高的環境中，可引起蛋白質變性或由於(yu) 熱效應引起緩衝(chong) 液中水分蒸發，使緩衝(chong) 液濃度增加，造成膜片幹涸。電流過低，則樣品泳動速度慢且易擴散。
5、染色液的選擇
　　對醋酸纖維素薄膜電泳後染色應根據樣品的特點加以選擇。其原則是染料對被分離樣品有較強的著色力，背景易脫色；應盡量采用水溶性染料，不宜選擇醇溶性染料，以免引起醋酸纖維素膜溶解。
　　應控製染色時間。時間長，薄膜底色深不易脫去；時間短，著色淺不宜區分，或造成條帶染色不均，必要時可進行複染。 　
　
6、透明及保存
　　透明液應臨(lin) 用前配製，以免冰乙酸及乙醇揮發影響透明效果。這些試劑最好選用分析純。透明前，薄膜應*幹燥。透明時間應掌握好，如在透明乙液中浸泡時間太長則薄膜溶解，太短則透明度不佳。
　　透明後的薄膜*幹燥後才浸入石蠟中，使薄膜軟化。如有水，則液體(ti) 石蠟不易浸入，薄膜不易平展。宜。

巴比B 妥電泳緩衝(chong) 液配置簡單介紹