液體樣本甘油檢測試劑盒這麽操作更準確

液體(ti) 樣本甘油檢測試劑盒這麽(me) 操作更準確

上海信帆生物供應甘油檢測試劑盒，可以檢測的樣本包括血液、細胞培養(yang) 基、體(ti) 液、酒類飲料中的甘油濃度。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為(wei) 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chan) 生過氧 化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉化為(wei) 苯醌亞(ya) 胺，其光密度值與(yu) 甘油濃度成正比。

適用範圍：測定血液、細胞培養(yang) 基、體(ti) 液、酒類飲料中的甘油濃度。

組成 ：

R1 試劑 40 ml R2 試劑 10 ml

4 mmol/L 甘油標準品 1 ml

4 ºC，儲(chu) 存 6個(ge) 月。

所需設備：酶標儀(yi) 、生化分析儀(yi) 或 721、722 型可見光分光光度計。最佳工作波長 550nm，如 無此波長建議優(you) 先選用 570nm、次選 530、490nm。

操作步驟：

一. 樣本處理： 酒類、飲品、清澈液體(ti) 樣本：可直接進行測定，如超過線性範圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋後 再測定。

培養(yang) 液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養(yang) 基，如有細胞碎片應 4ºC,，12,000g 離心 5min,

取上清進行測定。

血液：新鮮抗凝血，4ºC，2,000g 離心 5min 得到血漿；非抗凝血，先 4ºC 靜置 2h 得到血清後， 2000g 離心 10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清 70ºC 加熱 10 分鍾滅活內(nei) 源脂肪酶，12,000g 離心 10min ,取上清測定或-20ºC 保存。

二 .工作溶液配製：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與(yu) 1 ml 試劑 R2 混合，立即使用或 4ºC 保存

<1 天，變色棄去。

三 .標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與(yu) 樣品緩衝(chong) 液一致的液體(ti) ，將 4 mM 甘油標準品倍比稀 釋為(wei) 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中 4~6 管即可， 注意設置 0 濃度對照反應管。

四. 甘油濃度測定：

1.參見下表進行加樣。為(wei) 使反應時間盡量一致，減小實驗誤差，可先加入標準品、待測樣品，然後再加入工作溶液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與(yu) 工作溶液按照   100µl:100µl體(ti) 積混合，然後再進行測定，但是如果樣品體(ti) 積超過  100µl    時將會(hui) 稀釋工作液中酶的濃度，使 反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性範圍，可進行適當稀釋，然後根據稀釋倍數來計算樣品中甘油濃度。）

2.37ºC 或 25ºC 反應 15 分鍾。反應平衡後顏色在 60 分鍾內(nei) 穩定。 3.先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然後測定各管 OD 值。

4.繪製標準曲線並計算甘油濃度。

附 Excel 作圖步驟：各標準管 OD 值為(wei) y 軸，標準品濃度為(wei) x 軸。(1)鼠標左鍵圈住數據，點擊

做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊

-選項-，點擊-顯示公式-和-R2    值

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