HEPES溶液(0.5mol/L) 應該如何使用

 HEPES溶液(0.5mol/L) 應該如何使用

上海信帆生物供應的 HEPES溶液，規格有100ml和500ml，濃度多樣，PH也有很多，滿足不同客戶的不同實驗。

詳情如下：

在細胞培養(yang) 過程中，經常少不了HEPES緩衝(chong) 液。那麽(me) ，HEPES緩衝(chong) 液的配製和使用方法怎樣呢?HEPES緩衝(chong) 液是一種弱勢，在開放式的培養(yang) 條件中，若加入HEPES，可防止培養(yang) 基內(nei) pH氧化升高，從(cong) 而將PH維持在7.0左右。

HEPES分子 量為(wei) 238.31，化學名：，分子式: C8H18N2O4S。

HEPES常用於(yu) 生物緩衝(chong) 劑，pH值緩衝(chong) 範圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取 試劑盒及PCR診斷試劑盒裏。對細胞無毒性作用。它是一種氫離子緩衝(chong) 劑，能較長時間控製恒定的pH範圍。使用終濃度為(wei) 10-50mmol/L。

關(guan) 於(yu) HEPES 緩衝(chong) 溶液的配製，不同的文獻資料有不同的說法。根據用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。各種配製方法總結如下：

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配製

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調節至少所需pH(HEPES的有效pH 範圍是6.8~8.2)，然後用蒸餾水定容至500ml，於(yu) 4攝氏度保存。

二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調節pH值，最後定容。

三、2×HEPES緩衝(chong) 鹽溶液的配製

將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5M NaOH調節至所需pH值，再用蒸餾水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有兩(liang) 種：

(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配製的培養(yang) 液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yang) 液中加入2.38克HEPES，待溶後用lN NaOH 調pH至7.2，濾過除菌後使用。此時HEPES的使用濃度為(wei) 10 mmol/L。

(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yang) 液加入 lml貯存液，最終應用濃度仍為(wei) 10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配製方法：取23.8g HEPES溶於(yu) 90ml雙蒸水中，用lN NaOH調pH至7.5一8.0，然後用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

需要注意的是，HEPES緩衝(chong) 液的使用終濃度為(wei) 10-50mmol/L，對細胞無毒性作用。一般情況下，濃度為(wei) 20mmol/L的HEPES即可達到緩衝(chong) 能力。現在市售HEPES為(wei) 約10g包裝的小瓶，大家根據實際情況正確靈活配製就OK了

HEPES溶液(0.5mol/L) 應該如何使用