ELISA中常見問題及解決方法總結

ELISA中常見問題及解決(jue) 方法總結

 上海信帆生物供應各類ky体育在线登陆，質量穩定，靈敏度高，提供實驗代測服務。

elisa 試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在研究上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(ge) 環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個(ge) 環節常出現問題的原因及解決(jue) 辦法總結於(yu) 下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。

下麵分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，並給出相應的解決(jue) 辦法

1. 選擇試劑

選擇質量優(you) 良的檢測試劑，嚴(yan) 格按照試劑說明書(shu) 進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鍾。

2 加樣

可能原因： ① 血清或血漿標本分離不好即進行加樣; ② 手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nei) 溫度較高時); ③ 加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決(jue) 辦法： ① 標本為(wei) 血清：最好將血液先自然存放1-2小時後，再用3000rmp離心15分鍾;標本為(wei) 血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血後必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間後，3000rpm離心15分鍾;若在幾天內(nei) 檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置於(yu) -20℃的低溫冰箱內(nei) 。 ② 加樣後及時放入孵箱。 ③ 加酶試劑後用吸水紙在酶標板表麵輕拭吸幹。④ 如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他後處理儀(yi) 器加酶試劑。 ⑤ 標本較多時，請分批操作。

3. 孵育

可能原因： ① 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附於(yu) 孔壁，難於(yu) 清洗*; ② 孵育時間人為(wei) 延長，導致非特異性結合緊附於(yu) 反應孔周圍，難以清洗*。解決(jue) 辦法：① 貼封片或加蓋; ② 按說明步驟嚴(yan) 格控製操作時間。

4. 洗板

可能原因： ①采用手工洗板,孔與(yu) 孔之間液體(ti) 交叉。 ② 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導致洗板效果差。 ③ 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決(jue) 辦法： ① 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後最好在吸水紙(選擇幹淨、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍幹; ② 合理安排，或多用幾台洗板機。

5. 顯色

可能原因： ① 顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑; ②加顯色劑時濺出孔外造成液體(ti) 回流。解決(jue) 辦法： ① 顯色劑盡量在臨(lin) 用前配製，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; ② 加樣時保持顯色劑不外流; ③ A、B液應避免接觸金屬器械。

6. 終止

可能原因如加終止液時產(chan) 生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chan) 生氣泡。

7. 讀板

如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。

所以在整個(ge) 操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。

在實際操作中，除了選擇優(you) 良試劑外，必須嚴(yan) 格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nei) 質控、室間質評，以嚴(yan) 謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內(nei) 已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀(yi) ，這對於(yu) 實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。

 ELISA中常見問題及解決(jue) 方法總結