上海信帆生物組織開展了：血液樣本的收集與保存的培訓活動

上海信帆生物組織開展了：血液樣本的收集與(yu) 保存的培訓活動

上海信帆生物針對血液樣本的收集和保存開展了培訓活動，希望此次的分享對大家有所幫助！

全血根據收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩(liang) 種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體(ti) 我們(men) 稱之為(wei) 血清；抗凝分離出的上層黃色的液體(ti) 我們(men) 稱之為(wei) 血漿。

標本的存放溫度及時間，血清、血漿及細胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗結果的重要因素。抽血後，血細胞因代謝需要，要消耗掉部分營養(yang) 成分，故對這些成分進行測定時，需及時地離心以分離掉細胞成分。

采血前個(ge) 體(ti) 的準備情況，如空腹時間的長短、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢；止血帶應用時間，輸液情況，體(ti) 育運動，抗凝劑及穩定劑的選用；標本的處理等均可影響到某些檢驗指標的水平。故標本采集過程應標準化，以大限度地減少分析前誤差。

一、不抗凝收集血清：

1、無添加劑的幹燥空管收集:

血管內(nei) 壁均勻塗有防止掛壁的藥劑(矽油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出後，離心使用。主要用於(yu) 血清生化(肝功、腎功、心肌酶、澱粉酶等)、電解質(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標誌物、血清免疫學檢測。
    亦可直接用幹燥EP管收集全血，充分靜置使得紅細胞充分自然凝固後，離心分離出血清待用或保存。

2、用促凝管收集:

采血管內(nei) 壁均勻塗有防止掛壁的矽油，同時添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體(ti) ，進而形成穩定的纖維蛋白凝塊，如果想快點出結果時，可采用促凝管。一般靜置半小時到1小時，直接離心分離出血清待用或保存,常用於(yu) 急診生化。

3、含有分離膠及促凝劑的采血管收集：

管壁經過矽化處理，並塗有促凝劑可加速血液的凝固，縮短檢驗時間。管內(nei) 加有分離膠，分離膠與(yu) PET管具有很好的親(qin) 和性，確實起到隔離作用，一般即使在普通離心機上，分離膠能將血液中的液體(ti) 成分(血清)和固體(ti) 成分(血細胞)*分開並積聚在試管中形成屏障。離心後血清中不產(chan) 生油滴，主要用於(yu) 血清生化(肝功、腎功、心肌酶、澱粉酶等)、電解質(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標誌物、血清免疫學。

    用促凝管的優(you) 點：

①、加速紅細胞的凝固，無需長時間的靜置；

②、帶有分離膠，有效的將血清分離出來，更好的避免溶血；

    收集血清的缺點：

①、需要紅細胞的充分凝固，所需靜置時間較長；

②、分離出的血清相對較少，1ml全血不抗凝約隻能分離出0.2-0.3ml血清。

二、抗凝收集血漿：

收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝後，可直接離心分離血漿待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。

1、肝素抗凝：

常用的抗凝劑，一般情況下對相關(guan) 指標都不會(hui) 有幹擾，同時抗凝比例較大（抗凝劑：

全血=1:30），對血液基本沒有稀釋影響。

肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖，帶有強大的負電荷，具有加強抗凝血酶III滅活絲(si)

氨酸蛋白酶的作用，從(cong) 而阻止凝血酶的形成，並有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用於(yu) 生化及血流變的檢測，是電解質檢測的佳選擇，檢驗血標本中的鈉離子時，不能使用肝素鈉，以免影響檢測結果。也不能用於(yu) 白細胞計數和分類，因肝素會(hui) 引起白細胞聚集。

盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質濃度無顯著差別，但肝素鋰還是被認為(wei) 是好的。這主要是人們(men) 認為(wei) 肝素鈉可使鈉的測定值偏高，肝素銨可使血氨測定值偏高（尿素酶法測定）。

肝素可抑製分子生物學中常用的一些工具酶，如限製性內(nei) 切酶、Taq酶等，可影響PCR

的實驗結果。可采用一些方法消除肝素的抑製效應，如利用肝素酶，或在分離白細胞後用緩衝(chong) 液洗滌白細胞兩(liang) 次以上等。然而，許多實驗工作者仍不願意在進行分子生物學實驗時采用肝素作抗凝劑。

2、EDTA抗凝：

乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸，可以有效地鼇合血液中的鈣離子，鼇合鈣會(hui) 將鈣從(cong)

反應點移走將阻止和終止內(nei) 源性或外源性凝血過程，從(cong) 而防止血液凝固，與(yu) 其他抗凝劑比較而言，其對血球的凝集及血細胞的形態影響較小，故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為(wei) 抗凝劑。用於(yu) 一般血液學檢查，不能用於(yu) 血凝、微量元素及PCR檢查。
    由於(yu) EDTA會(hui) 螯合重金屬離子，用該抗凝劑的話，部分帶有金屬離子的大分子酶都會(hui) 有大量損失，具體(ti) 看客戶測定的指標來選擇，做血常規的話必須用EDTA抗凝。

   3、枸櫞酸鹽抗凝:

檸檬酸鈉通過作用於(yu) 血樣中鈣離子鼇合而起抗凝作用，國家研究實驗室標準化委員會(hui) (NCCLS)推薦為(wei) 3.2％或3.8％，抗凝劑與(yu) 血比例為(wei) 1：9，主要用於(yu) 纖溶係統(凝血酶原時間、凝血酶時間、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原)。采血時應注意采足血量，以保證檢驗結果的準確性，采血後應立即輕輕顛倒混勻5-8次。由於(yu) 抗凝比例較小（抗凝劑：全血=1:9），對血液有一定的稀釋，一般不建議。

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血後一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

       ③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿）;

       ④、抗凝收集的血漿冷凍保存後，解凍時可能會(hui) 出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁後

用於(yu) 測定。

       血清、血漿收集好後，暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如*凍融，-20℃以下可保存一個(ge) 月,-70℃以下可保存三個(ge) 月。

三、收集血清、血漿所用離心轉速：

   分離血清或血漿，根據種屬不同，離心轉速也有差異,推薦離心轉速為(wei) :

       ①、小鼠：一般1000-1500轉/分，離心8-10分鍾；

②、大鼠、兔子：一般2000-2500轉/分，離心8-10分鍾；

③、人：一般2500-3000轉/分，離心8-10分鍾。

四、高脂及溶血因素的影響:

溶血的影響:

溶血對某些檢驗指標的的影響不僅(jin) 取決(jue) 於(yu) 所采用的方法，也取決(jue) 於(yu) 所用的分析儀(yi) 器。采用雙

波長測定法可在一定程度上消除Hb的顏色幹擾，然而Hb的幹擾並不能*消除，尤其是當Hb可以與(yu) 采用的試劑發生作用時。總的來說，輕微的溶血，對大多數研究化學指標的測定方法無明顯幹擾。嚴(yan) 重的溶血，可能有兩(liang) 方麵的影響：（1）測定成分在紅細胞內(nei) 的濃度高於(yu) 血漿時，導致測定結果偏高；（2）測定成分在RBC內(nei) 濃度低於(yu) 血漿時，產(chan) 生輕微的稀釋效應。

用肉眼觀察標本是否溶血隻能是粗略的判斷。隻有當血清中血紅蛋白濃度超過20mg/dl時，

肉眼才能見到溶血情況。有人報導0.1％的紅細胞發生溶血後，其血清外觀與(yu) 非溶血標本一致；

1％紅細胞發生溶血後，血清清亮，呈櫻紅色，這樣的標本就代表了中度溶血。

有人建議用血清Hb濃度來對溶血程度進行判斷。非溶血標本血清遊離Hb為(wei) 4.8±3.2mg/dl,中度溶血血清Hb為(wei) 43.5±13.9mg/dl。即使輕微的溶血也可能導致相應指標的測定結果偏高(如LDH、ACP、K等)，這樣的標本應盡量避免使用。

高脂的影響:

高脂血症所產(chan) 生的混濁對某些指標測定的影響，同樣取決(jue) 於(yu) 所采用的測定方法。一般而言，脂血通過樣品不均一性、水置換、親(qin) 脂成分的吸收而影響檢驗結果的準確性。肉眼可見的脂血標本可影響總蛋白的測定、電泳及色譜分析等。

五、全血或紅細胞的收集及保存

        測定全血或者是紅細胞中相關(guan) 指標的話，首先需要收集抗凝全血。

   全血：收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝後，可直接定量吸取全血，用冷蒸餾水製備溶血液後

用於(yu) 不同指標的檢測；也可定量吸取全血，轉入EP管，低溫凍存（溫度越低越好），測定

之前解凍並按比例加入冷蒸餾水製成溶血液用於(yu) 檢測。

   紅細胞：收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝後，直接離心吸走血漿，留下層紅細胞，加入3倍

體(ti) 積的生理鹽水，輕輕顛倒混勻，500～1000轉/分,離心5分鍾，棄上清留沉澱紅細胞,

重複2～3次,至上清液無色為(wei) 止（洗滌紅細胞）。

        ①、直接定量吸取紅細胞，按比例加入冷蒸餾水製成溶血液待測；

②、定量吸取紅細胞，轉入EP管，立即低溫凍存（溫度越低越好），測定之前解凍，並按

比例加入冷蒸餾水製成溶血液用於(yu) 檢測(解凍後部分紅細胞會(hui) 破裂,因此樣本冷凍保存之

前必須進行定量)。

    溶血液的製備：定量吸取紅細胞或者全血，按比例加入冷蒸餾水，充分漩渦混勻製備溶血液

(對光觀察，溶液澄清透亮,可顯微鏡觀察紅細胞是否破裂,如未破可延長混勻時間)，稀釋

成不同濃度用於(yu) 不同指標的檢測。

上海信帆生物組織開展了：血液樣本的收集與(yu) 保存的培訓活動