上海信帆生物組織開展了：細胞樣本的前處理和保存的培訓活動

上海信帆生物組織開展了：細胞樣本的前處理和保存的培訓活動

很多老師在收集樣本的時候，樣本是細胞樣本，不清楚應該如何進行前處理，如果保存，今天讓我們(men) 跟著上海信帆生物一起來了解一下細胞樣本的前處理方法吧！

一、勻漿介質

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩衝(chong) 液(PBS),客戶可根據樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環境。

二、細胞樣本的前處理:

1、細胞沉澱的收集：

① 懸浮細胞: 對於(yu) 懸浮培養(yang) 的細胞，直接通過離心收集細胞沉澱，將培養(yang) 液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鍾，棄上清留細胞沉澱。

② 貼壁細胞: 對於(yu) 貼壁培養(yang) 的細胞，用胰酶將細胞消化下來，或用細胞刮將細胞刮下來，將培養(yang) 液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鍾，棄上清留細胞沉澱。

我們(men) 一般建議客戶，細胞密度好不要小於(yu) 一百萬(wan) 個(ge) /ml。

2、細胞沉澱的洗滌：

在細胞沉澱中加入0.5-1ml的PBS （等滲）， 輕輕顛倒混勻，將培養(yang) 液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鍾，棄上清留細胞沉澱。

重複上述操作反複洗滌1～2次。

3、勻漿的方式：手工勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,反複凍融。

① 手工勻漿：在細胞沉澱中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小於(yu) 一百萬(wan) 個(ge) /ml），混勻，將細胞懸浮於(yu) PBS中，用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置於(yu) 冰水混合物中，手動勻漿3分鍾，然後取破碎好的細胞懸浮液進行測定。

② 超聲破碎:

在細胞沉澱中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小於(yu) 一百萬(wan) 個(ge) /ml），混勻，將細胞懸浮於(yu) PBS中，在冰水浴條件下進行如下操作:

     a、用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產(chan) 超聲波發生儀(yi) ，用400安培，5秒/次，間隙10秒反複3～5次。

      b、用超聲細胞破碎儀(yi) ，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重複4～5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的，或者說作用力量強弱不同。

1、SDS屬於(yu) 離子型去垢劑，厲害，基本可以把細胞*破掉，DNA會(hui) 釋放出來，裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介於(yu) NP40和SDS之間，偏向於(yu) NP40，也是常用的細胞裂解液成分之一，在保護蛋白活性方麵有一定作用（SDS基本會(hui) 使蛋白變性失活）。

去垢劑屬性隻是一方麵，buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guan) 鍵因素

由於(yu) 很多裂解液都是蛋白變性劑,對酶活力的測定有一定的影響,一般不推薦用裂解液進行裂解。

④ 反複凍融:

在細胞沉澱中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小於(yu) 一百萬(wan) 個(ge) /ml），混勻，將細胞懸浮於(yu) PBS中，放低溫冰箱中結冰，溶解，再結冰，再溶解，反複3次左右）。

                由於(yu) 反複凍融對酶活力影響較大,一般不推薦使用

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