玉米赤黴烯酮酶免檢測試劑盒適合檢測什麽樣本？

玉米赤黴烯酮酶免檢測試劑盒適合檢測什麽(me) 樣本？

上海信帆生物供應玉米赤黴烯酮酶免檢測試劑盒，產(chan) 品質量穩定，現貨充足。

玉米赤黴烯酮(Zearaleaone)ELISA 檢測試劑盒說明書(shu)  

【概要】

玉米赤黴烯酮（Zearaleaone，ZEN）又稱F-2 毒素，是玉米赤黴菌的代謝產(chan) 物，有雌激素樣作用，具有較強的生殖毒性致畸作用，可引起動物發生雌激素亢進症，導致動物不孕或流產(chan) ，對家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業(ye) 帶來很大經濟損失。

【適用範圍】

本試劑盒可定性、定量檢測穀物及其加工製品和飼料中的

玉米赤黴烯酮。

【試驗原理】

本試劑盒采用間接競爭(zheng) ELISA 方法，在酶標板微孔條上預包被玉米赤黴烯酮抗原，樣本中玉米赤黴烯酮和此抗原競爭(zheng) 結合抗玉米赤黴烯酮抗體(ti) （抗試劑），同時抗玉米赤黴烯酮抗體(ti) 與(yu) 酶標二抗（酶標物）相結合，經TMB 底物顯色，樣本吸光值與(yu) 其所含玉米赤黴烯酮的含量成負相關(guan) ，對照標準曲線，再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中玉米赤黴烯酮的含量。

【試劑盒組成】

1. 96 孔板（8 孔*12 條）

2. ZEN 標準溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶）

0 ng/mL, 1 ng/mL,3ng/mL,10ng/mL, 25 ng/mL

3. ZEN 酶標物1 瓶.............. ....................................6mL

4. ZEN 抗試劑1 瓶....................................................6mL

5. 底物液1 瓶.............................................................6mL

6. 顯色液1 瓶.............................................................6mL

7. 終止液1 瓶.............................................................6mL

8. 濃縮洗滌液（20×） 1 瓶...............................20mL

9. 樣品稀釋液Ⅰ 2 瓶.............................................40mL

10. 樣品稀釋液Ⅱ 2 瓶.............................................40mL

11. 反應板支架.............................................................1 塊

注：48 孔型號試劑盒內(nei) 容物數量、體(ti) 積略有差別

【需要而未提供的設備及試劑】

設備：

┅┅酶標儀(yi) 450nm

┅┅振蕩器

┅┅粉碎機

┅┅離心機

┅┅天平：感量0.01g

┅┅微量移液器：單道20μL~200μL、100μL~1000μL

┅┅甲醇

┅┅去離子水

注：以上儀(yi) 器均可代購

【試劑配製】

1. 洗滌工作液：將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體(ti) 積比進行稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）。

2. 60%甲醇-水：取無水甲醇，用去離子水按6:4 體(ti) 積比例稀釋（6 份無水甲醇＋4 份水）。

【樣本前處理步驟】

一、小麥、大麥等穀物及其加工製品（稀釋倍數：20）

1. 稱取5.0g 粉碎後樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 後過濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用去離子水以1:3 稀釋（例：1mL 濾液+3mL 去離子水），充分混勻後即為(wei) 待測樣液；

4. 移取該樣液50uL 進行檢測。

二、玉米粉、麥類、麩皮、豆粕等穀物類以及玉米蛋白粉、雞料等飼料（稀釋倍數：60）

1. 稱取5.0g 粉碎後樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 後過濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻後即為(wei) 待測樣液；

4. 稀釋後的待測樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL進行檢測。

三、DDGS、玉米皮等飼料原料及豬料、鴨料、牛料等飼料混

合料（稀釋倍數：60）

1. 稱取5.0g 粉碎後樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 後過濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅱ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅱ），充分混勻後即為(wei) 待測樣液；

4. 稀釋後的待測樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL 進行檢測。

注意：若樣品中ZEN 偏高，建議將樣品提取液再進一步稀釋後檢測。

【檢測步驟】

一、測定前須知：

1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫（20~25℃）。

2. 使用之後立即將所有試劑及剩餘(yu) 板條放置2~8℃。

3. ELISA 分析中的再現性，很大程度上取決(jue) 於(yu) 洗板的一致

性，正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點。

4. 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，可用蓋板膜蓋

住微孔板。

二、操作步驟：

1. 將所需試劑及微孔板取出，放置室溫（20~25℃）30min

以上，液體(ti) 試劑使用前均須搖勻。

2. 取出所需數量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋中，

放置於(yu) 2~8℃冷藏。不可冷凍。

3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。

4. 將樣本和標準品對應微孔編號，建議每個(ge) 樣本和標準品做2 孔平行，並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5. 每孔加入250μL 左右洗滌液，洗滌液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍幹。

6. 分別加入標準溶液/待測樣液50μL 到對應的微孔中，加入酶標物50μL/孔，後再加入抗試劑50μL/孔，輕輕震蕩混勻，遮蓋後室溫（25℃）避光反應20min。

7. 小心揭開蓋板，甩掉反應液，加入洗滌液250μL/孔充分洗滌5 次，每次間隔40s，用吸水紙拍幹。

8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL，輕輕震蕩混勻，遮蓋後室溫（25℃）避光顯色15min。

9. 加入終止液50μL/孔，輕輕震蕩混勻，設酶標儀(yi) 於(yu) 450nm處讀取每孔OD 值。

(若無酶標儀(yi) ，則不加終止用目測法可進行判定)。

★注：該試劑盒佳反應溫度為(wei) 25℃，溫度過高或過低將導

致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。若環境溫度高於(yu) 或低於(yu)

25℃，請適當縮短或增加反應及顯色時間。如有疑問，歡迎

垂詢。

【結果判定】

標準曲線的繪製與(yu) 計算

用酶標儀(yi) 測得每孔的光密度值(A)，繪製標準曲線。通過

準曲線，可準確定量樣品中ZEN 含量。

標準曲線：橫坐標為(wei) ZEN 標準濃度的對數，縱坐標為(wei) 百

分比（即各標準品孔和樣品孔光密度值除以0 ng/mL 標準品

孔光密度值(A0)再乘以100%所得， 光密度值(標準孔或樣品

孔) ／光密度值(A0)×100%=%(縱坐標)）。相應每個(ge) 樣品的

ZEN 濃度可從(cong) 曲線上獲得。歡迎索取專(zhuan) 門的數據處理軟

件進行計算。

備注：試劑盒初篩後，若出現陽性結果，建議用仲裁法進一步

確證。

【注意事項】

1. 試劑及樣本沒有恢複到室溫（20~25℃）會(hui) 導致所有標準

的OD 值偏低。

2. 在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況，則會(hui) 出現標準

曲線不成線性，重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應

立即進行下一步操作。

3. 每種試劑使用前均需搖勻。

4. 反應終止液為(wei) 2M 硫酸，避免接觸皮膚。

5. 不要使用過了有效期的試劑盒；也不要摻雜使用過了有

效期的試劑盒；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6. 儲(chu) 存條件：試劑盒保存於(yu) 2~8℃，不能冷凍，將不用的

微孔板重新真空密封。標準物質和無色的顯色劑對光敏

感，因此要避光保存。

7. 試劑變質的跡象：顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質，

應當棄之。0 標準的吸光度（450/630nm）值小於(yu) 0.5

（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

8. 對玻璃器皿和ZEN 溶液消毒好用次氯酸鈉（10%，v/v）

溶液浸泡過夜。

9. 該試劑盒采用室溫反應（20~25℃），當反應溫度高於(yu)

25℃或者低於(yu) 20℃時，均需相應縮短或延長反應時間，

【貯藏條件及保存期】

貯藏條件：保存試劑盒於(yu) 2~8℃。

保存期：該產(chan) 品有效期為(wei) 6 個(ge) 月。生物試劑日期見包裝盒。

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