DNA含量檢測試劑盒，脫氧核糖核酸檢測試劑盒

DNA含量檢測試劑盒，脫氧核糖核酸檢測試劑盒

DNA含量檢測試劑盒

DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)

規格：20T/50T

保存：-20℃避光保存，一年有效。

試劑組成 ：

產(chan) 品說明：

細胞周期是指連續分裂細胞從(cong) 一次有絲(si) 分裂結束到下一次有絲(si) 分裂結束所經曆的整個(ge) 過程。在這個(ge) 過程中，細胞遺傳(chuan) 物質複製並加倍，且在分裂結束時平均分配到兩(liang) 個(ge) 子細胞中去。細胞周期又可以分為(wei) 間期和有絲(si) 分裂期，細胞間期常劃分為(wei) 休眠期（G 0 ），DNA 合成前期（G 1 ），DNA 合成期（S），DNA 合成後期（G 2 ），整個(ge) 周期可表示為(wei) G 1 →S→G 2 →M。DNA 周期檢測可用來反應細胞周期的各個(ge) 期的狀況，即細胞增殖狀況。利用細胞內(nei) DNA 能夠和熒光染料（如碘化丙啶 PI）結合的特性，細胞各個(ge) 時期其 DNA 含量不同從(cong) 而結合的熒光染料不同，流式細胞儀(yi) 檢測的熒光強度也不一樣。

    細胞發生凋亡時，由於(yu) 胞漿和染色質濃縮，核裂解，產(chan) 生凋亡小體(ti) ，使細胞的光散射性質發生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對 90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向角和 90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細胞儀(yi) 測定細胞光散射的變化來觀察凋亡細胞。用 PI 對細胞進行染色，凋亡細胞由於(yu) 總 DNA 量降低，於(yu) 正常 G 0 /G 1 細胞群前出現 DNA 低染細胞群，即G 1峰前出現亞(ya) 二倍體(ti) 峰（sub-G 1）,即細胞凋亡群。

    本試劑盒可應用於(yu) 培養(yang) 細胞（懸浮、貼壁）的 DNA 含量（細胞周期）檢測。

使用方法 ：（ 僅(jin) 供參考 ）

1、 用適當的方法誘導細胞凋亡，同時設立陰性對照組，並收集細胞。

2、 用 PBS 洗滌細胞一次，1500rpm，5min 離心收集，調整細胞濃度為(wei) 1×10⁶/ml,取 1ml 單細胞懸液。

3、 製備的單細胞懸液離心後，去除上清，在細胞中加入70%預冷乙醇 500ul 固定2小時至過夜，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液；如需要，細胞懸液可用200目細胞篩網過濾一次。

4、 細胞沉澱中加 100µl RNase A 溶液，重懸細胞，37℃水浴 30min。

5、 再加入 400µl PI 染色液混勻，4℃避光孵育 30min。

6、 上機檢測，記錄激發波長 488nm 處紅色熒光。

注意事項 ：

碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應注意避光。

PI 有毒，操作時應戴手套，並避免汙染。

熒光染料都存在淬滅問題，建議染色後盡量當天完成檢測。

DNA含量檢測試劑盒，脫氧核糖核酸檢測試劑盒