T細胞亞群試劑盒如何使用，操作過程詳解

T細胞亞(ya) 群試劑盒如何使用，操作過程詳解

上海信帆生物供應T細胞亞(ya) 群測試盒，產(chan) 品質量穩定，庫存充足，深受廣大科研用戶青睞！

T細胞亞(ya) 群檢測試劑盒說明書(shu)

一：試劑盒組成：

二：標本製備：

取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血1～2ml，PBS稀釋1-2倍後，沿裝有等量淋巴細胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液麵上層，保持兩(liang) 種液體(ti) 界麵清晰，離心（2000轉/分）15-20分鍾，吸取兩(liang) 液麵交界處的單個(ge) 核細胞層，加5倍PBS，離心（1000轉/分）5分鍾，棄上清液，沉澱即為(wei) 單個(ge) 核細胞。利用試管中剩餘(yu) 的少許回流液體(ti) （約一滴）混勻細胞，製成單個(ge) 核細胞懸液。滴30μl細胞懸液於(yu) 載玻片上，靜置2分鍾使細胞下沉粘附於(yu) 玻片上，吸去液體(ti) ，快速吹幹或37℃溫箱1小時烤幹。或用PBS將單個(ge) 核細胞調至2×10⁵個(ge) /ml，離心塗片機1000轉離心1-2分鍾製片，快速吹幹或37℃溫箱1小時烤幹。塗片前取防脫片劑5-10μl均勻推片，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻塗於(yu) 幹淨玻片上，待幹後製備細胞塗片，以防掉片。

三：顯色劑的配製：

分別取A液25ul，B液25ul置於(yu) 幹淨試管中混勻，室溫放置2-5分鍾，加1ml蒸餾水，混勻，再加C液100ul待用。

*使用前，根據所需顯色劑用量，按照以上比例現配現用。

四：標本染色：

1. 充分幹燥（室溫2小時以上或過夜）的細胞塗片先用記號筆在標本外畫圈，然後滴加固定液50μl，室溫靜置2-3分鍾，用PBS淋洗，擦幹玻片背麵及細胞外的PBS。

*以下反應均需在濕盒中進行。

2. 分別滴加抗人CD3、CD4、CD8單抗適量(10-30μl）,4℃過夜，PBS淋洗3次。

3. 滴加生物素標記抗小鼠IgG適量（10-30μl），37℃孵育30-45分鍾，PBS淋洗3次。

4. 滴加堿性磷酸酶標記鏈黴卵白素適量（10-30μl）37℃孵育30-45分鍾，PBS淋洗3次。

5. 滴加顯色劑30-50μl，室溫顯色20-40分鍾。可在顯微鏡下觀察，待細胞膜上出現紅色標記物時，用PBS淋洗。

6. 滴加細胞核複染液30-50μl，30秒後自來水淋洗。

7. 滴加封片劑，蓋片封片，鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。

五：觀察：

高倍鏡下選取染色好的視野記數100-200個(ge) 單個(ge) 核細胞，細胞表麵有紅色標記物為(wei) 陽性細胞。算出陽性率。

六：正常參考值：

正常人外周血中，陽性細胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，20-30%；CD4/CD8的比值在1.5-2.0範圍內(nei) 。

七：儲(chu) 存條件及有效期：

2-8℃保存，禁止冷凍，有效期為(wei) 12個(ge) 月。有效期內(nei) 可在0-25℃範圍內(nei) 七天短時運輸。使用時應及時及拿及用，使用後應立即放回冰箱。生物試劑日期，使用期限或失效日期見標簽。

八：注意事項：

1. 免疫細胞化學檢測是一種包含多步驟的檢測方法，試劑的選擇、樣本的處理、塗片的製備、染色及其結果的判讀均需要進行專(zhuan) 業(ye) 的培訓。

2. 任何陽性或陰性的解讀，應由病理科醫生結合病理形態學，研究表現及其它檢測方法進行，不作為(wei) 單獨的診斷指標。

3. 複染過度或不足都可能影響結果的判讀。

4. 陰性結果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無該抗原存在，待測抗原編碼基因變異，抗原低表達或抗原修複不當等，都會(hui) 造成抗原無法檢出。

5. 本試劑僅(jin) 對經處理的人外周血細胞進行驗證，不做其他用途

6. 試劑盒使用中，應有適當的防護措施，以避免試劑同皮膚和眼睛接觸。

T細胞亞(ya) 群試劑盒如何使用，操作過程詳解