IMAC（His） 預裝柱的使用方法-上海信帆生物

IMAC(His) 預裝柱的使用方法-上海信帆生物

上海信帆生物供應IMAC(His) 預裝柱，產(chan) 品質量穩定，價(jia) 格實惠，深受廣大科研用戶青睞！

建議使用高純度的咪唑，高純度的咪唑在280nm的吸光值較低，甚至不顯示吸光值。緩衝(chong) 液中咪唑的佳濃度因蛋白的濃度和性質而異。

如果重組His標簽蛋白是以包涵體(ti) 的形式表達，建議在各緩衝(chong) 液或樣品中添加6M鹽酸胍或8M尿素。使用高濃度的尿素或鹽酸胍，有可能引起蛋白變性，變性蛋白可以實現複性。

當純化柱所需柱壓明顯升高時，則需要清洗，清洗方法如下：

a. 用至少5~10倍體(ti) 積的100mM EDTA清洗柱體(ti) ；

b. 用10倍體(ti) 積的1.5M NaCl清洗柱體(ti) ；

c. 用10倍體(ti) 積的蒸餾水清洗柱體(ti) ；

d. 用0.2M NaOH處理1~2小時（清除內(nei) 毒素需12小時）；

e. 用10倍體(ti) 積的蒸餾水清洗柱體(ti) ；

f. 用2倍體(ti) 積0.1~0.5%的非離子去汙劑（溶於(yu) 0.1M醋酸）處理1-2小時；

g. 用5倍體(ti) 積70%的乙醇清洗柱體(ti) ；

h. 用10倍體(ti) 積的蒸餾水清洗柱體(ti) 。

保存溫度：

用20%的乙醇在中性pH值的條件下衝(chong) 洗介質和柱子，在4℃~8℃條件下儲(chu) 存。

應用實例：

哺乳動物細胞表達的HIS標簽蛋白，其細胞分泌上清通過IMAC(His)柱進行富集濃縮，高效地純化回收。

圖例）

泳道1：上樣；

泳道M：Protein Marker；

泳道3：流出；泳道4：洗脫1；

泳道5：洗脫2；泳道6：洗脫3。

產(chan) 品描述:

螯合的Sepharose，當帶有Ni2+離子時，如果形成氨基酸殘基的複合物，特別是組氨酸殘基被暴露在蛋白質表麵時，可以選擇性的結合蛋白質。(His)6融合蛋白可以很容易的結合到親(qin) 和柱上，然後用含有咪唑的緩衝(chong) 液進行洗脫。 

產(chan) 品用途：

His融合蛋白的純化。

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