甘油檢測試劑盒應該如何正確使用

甘油檢測試劑盒應該如何正確使用

描述：甘油是甘油三酯的水解產(chan) 物。脂蛋白酯酶能夠水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能夠水解脂肪細胞中的甘油三酯。與(yu) 遊離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標，但檢測更加方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法與(yu) 經典的GPO-Trinder 酶學反應方法，通過比色測定液體(ti) 樣本中的甘油含量。經過優(you) 化後，操作步驟更加簡單，檢測線性範圍在10-1200µmol/L，可靠性和重複性俱佳，適合生物醫學、食品實驗室檢測。

規格： 250次

儲(chu) 存：4℃  6個(ge) 月

操作步驟：

一 樣本處理：

1.       酒類、飲品、清澈液體(ti) 樣本：可直接進行測定，如超過線性範圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋後再進行測定。

2.       培養(yang) 液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養(yang) 基，如有細胞碎片應4ºC,，12,000g離心5min,取上清進行測定。

3.       血液：對於(yu) 新鮮抗凝血而言，可4ºC，2,000g離心5min得到血漿；而對於(yu) 非抗凝血來說，可先4ºC靜置2h得到血清後，2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清70ºC 加熱10分鍾滅活內(nei) 源脂肪酶，12,000g離心10min ,去上清進行測定或-20ºC保存。

二 工作溶液配製：按4:1比例，取4 ml試劑R1與(yu) 1 ml試劑R2混合即可，立即使用或4ºC保存<1天，變色棄去。

三 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與(yu) 樣品緩衝(chong) 液一致的液體(ti) ，將4 mM甘油標準品倍比稀釋為(wei) 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設置0濃度對照反應管。

四 甘油濃度測定：

1.       加樣。為(wei) 使反應時間盡量一致，減小實驗誤差，可先加入標準品、待測樣品，然後再加入工作溶液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與(yu) 工作溶液按照100µl:100µl體(ti) 積進行混合，然後再進行測定，但是如果樣品體(ti) 積超過100µl時將會(hui) 稀釋工作液中酶的濃度，致使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性範圍的時候，可進行適當稀釋，然後根據稀釋倍數來計算樣品中甘油濃度。）

2.       37ºC或25ºC反應 15分鍾。反應平衡後顏色在60分鍾內(nei) 穩定。

3.       先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然後測定各管OD值。

繪製標準曲線並計算甘油濃度。附Excel作圖步驟：各標準管OD值為(wei) y軸，標準品濃度為(wei) x軸。(1)鼠標左鍵圈住數據，點擊做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R²值-。

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